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【求助】请教下梯度洗脱时基线的问题。

液相色谱(LC)

  • 觉得很诡异的事情。。。

    安捷伦1100的机器
    梯度洗脱
    前三分钟 H2O:ACN=50:50
    后七分钟 H2O:ACN=5:95

    第一批实验的图谱中基线是“下楼梯”的,即第一段在0mv,三分钟之后逐渐降到-200mv左右。都比较平稳
    第二批实验的图谱中基线却突然变成了“上楼梯”的,第一段还是在0mv,三分钟之后主见升到20mv。也比较平稳

    我第一个猜测是两个流动相给弄反了,因为两次实验之间我加过溶剂。但是重新使用新的流动相,确定无误后,基线仍然是上楼梯的。而且我观察“上楼梯”的图谱的pressure 变化,是下降的过程,应该是对的吧?(ACN多,压力小)

    请问下大家这么诡异的事情,有什么可能的原因呢?
    从理论上说,基线应该是上楼梯的还是下楼梯的呢?

    多谢多谢
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  • muziying114

    第3楼2009/11/17

    乙腈越多,洗脱能力越强,流动性越强,柱压越低,这是没有问题的。

    一、甲醇和乙腈在200nm左右都有一定紫外吸收,梯度洗脱基线都会有一定漂移,特别在低波长下。如果您的物质有多个吸收峰,在300-400nm处还有吸收峰,且强度不太弱的话,选择此波长内定量较好。

    二、梯度洗脱中,有机相增加,基线往往上漂较多(个人观点),但无论怎样,两次漂移的方向应该一致,所以得确认下:1.梯度洗脱完毕后,下一次进样前的平衡时间是否一致,如每次平衡的时间不一样,对基线走向和波动大小都有影响;2.管路是否进气泡,等度条件下观察下压力变化情况。

    三、怕流动相配错,带个样看看保留时间就行,不用重配。

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  • 有水有渝

    第4楼2009/11/17

    应助达人

    我认为应该是乙腈增加基线上漂,做过的含乙腈的梯度都是这个样子的。

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  • dicmi

    第5楼2009/11/18

    这么说的话,看来之前做的下降的基线原来都是不对的,可是怎么会出现这样的情况呢?有点奇怪。

    另外回复muziying114 的建议:
    1)平衡时间都是一致的,用的是自动进样器
    2)流动相我做过脱气,管路我也purge过,我们还有个degas的装置,等度条件下,压力是平稳的



    谢谢muziying114 和 xky0230699

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  • dicmi

    第6楼2009/11/18

    这么说的话,看来之前做的下降的基线原来都是不对的,可是怎么会出现这样的情况呢?有点奇怪。

    另外回复muziying114 的建议:
    1)平衡时间都是一致的,用的是自动进样器
    2)流动相我做过脱气,管路我也purge过,我们还有个degas的装置,等度条件下,压力是平稳的



    谢谢muziying114 和 xky0230699

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  • muziying114

    第7楼2009/11/18

    基线改变后,目标物的保留时间和响应有变化吗?

    dicmi(dicmi) 发表:这么说的话,看来之前做的下降的基线原来都是不对的,可是怎么会出现这样的情况呢?有点奇怪。

    另外回复muziying114 的建议:
    1)平衡时间都是一致的,用的是自动进样器
    2)流动相我做过脱气,管路我也purge过,我们还有个degas的装置,等度条件下,压力是平稳的



    谢谢muziying114 和 xky0230699

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  • dicmi

    第8楼2009/11/18

    我是用来测DEHP和BBP的

    基线改变后,两个响应峰不仅响应值变的异常的低,而且保留时间都不一样了。

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  • muziying114

    第9楼2009/11/18

    问题的关键不是基线漂移,而是由某种原因引起,导致了信号强度和保留时间都发生了改变,同时基线也相应的变化了。
    试试看:
    一、超声清洗下水相的滤头,水相滤头脏时保留时间会提前,顺便确认下在线过滤器和单向阀有没有问题。(您的保留时间是提前吗?)

    二、确认下有没有哪里漏液。

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