【求助】对于出口的大蒜素的主含量hplc检测

应助达人

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1.范围
本方法规定了保健食品中大蒜素（三硫二丙烯，C6H10S3）的测定方法。
本方法适用于以大蒜（油）为主要原料，制成的酒、胶囊、片剂中大蒜素的含量测定。
本方法最低检出浓度为0.0430mg/ml；取100mg试样，提前定容5.0ml时，试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。
本方法最佳线性范围：0.320－3.00µg。
2.原理
根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外标法定量。
3.试剂
3.1 无水乙醇 分析纯。
3.2 正己烷 分析纯。
3.3 大蒜素标准溶液 准确称量大蒜素标准品0.1000g，加入正己烷并定容至10mL，该标准溶液浓度为10.0mg/mL。此溶液可在冰箱中保存七天。该标准溶液以正己烷－无水乙醇（1：1）稀释10倍后作为标准使用液，标准使用液浓度1.0mg/mL。
4.仪器设备
4.1 气相色谱仪：附氢火焰检测器（FID）。
4.2 数据处理机，或积分仪。
4.3 分析天平：万分之一。
4.4 超声清洗机。
4.5 离心机。
5.分析方法
5.1 样品处理
5.1.1 固体样品：准确称取0.0100g样品，加入2.5mL无水乙醇，密塞，超声提取70min，取出后冷却，加入约10mL正己烷（调节大蒜素含量约为1.0mg/ml左右），振摇，静置分层后取上清液进样。
5.1.2 液体样品：精密吸取20.0mL样品，于分液漏斗中，加入5mL正己烷振摇提取1min，静置（或离心）分层后，取上清液进样。
5.2 气相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：玻璃色谱柱长：2米，内装担体：硅藻土/（Chromosorb W.AW）,（60~80目）；固定相：0.5%已二酸乙二醇酯（EGA）。
5.2.2 柱箱温度：90℃。
5.2.3 进样口温度：150℃。
5.2.4 鉴定器温度：150℃。
5.2.5 气体流速：氮气55mL/min，氢气50mL/min，空气500mL/min。
5.2.6 进样量：1μL。
5.2.7鉴定器灵敏度：2；记录仪衰减：3。
5.2.8进样量：1μL。
5.3定性分析
在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时间定性。
5.4定量分析
试样中大蒜色素谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比较定量。
5.5分析结果表述
试样中大蒜素的含量按式（5.5.1）计算。
5.5.1计算
A1×C1×V
W = —————— ×100
A×M×1000
W－大蒜素的含量，mg/100g；
A1－试样使用液色谱峰面积或峰高；
A2－标准使用液峰面积或峰高；
C－标准使用液浓度，mg/mL；
V－试样定容体积，ml；
m－试样的质量，g。
5.5.2结果表示计算结果保留三位有效数字。
6 技术参数
6.1回收率：在不同的试样中不同浓度加标回收率为97.8－116％。
6.2精密度：同一试样6次测定结果的RSD为2.10％。
6.3两次测定结果相对误差：≤10％
6.4干扰因素：在超声时，注意密塞。
7参考色谱图（略）