【分享】色谱常见问题回答

midiqi

2010/01/05

私聊

液相色谱（LC）

问：用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?

答：关于漂移问题：
　　1温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定
　　2流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
　　3柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡

关于快速变化问题
　　1流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定
　　2泵手动泵CP-700 中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
　　3流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合

问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题?

答：1柱效要高
　　2热稳定性好
　　3化学惰性强

具体选择应注意
　　1柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析
　　2柱子内径。内径大小决定柱容量
　　3液膜厚度。分析样品温度一不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄
　　4柱长度。柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度
　　5外涂层(柱体)的选择
　　6另外还有仪器型号、分析对象等因素

问：液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

答：1筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
　　2存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

问：从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏?

答：1分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好。
　　2理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定
　　3柱子的极性。热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。
　　4噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加.
　　5柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。

问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响?

答：进样器内的玻璃衬套主要有下列作用：
　　1提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。
　　2玻璃的惰性不如不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。
　　3易于拆换清洗，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。
　　4可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。

问：毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么?

答：1进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。
　　2进样器温度太高，某些组分可能发生热分解，也有的样品可能发生催化分解，或样品部分地被吸附在进样器内表面上。
　　3在分流点以前样品没有混合均匀或混合不充分。
　　4系统的进样垫，柱接头铜制防水接头JG-T-M 等地方漏气。

问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

答：1样品量不足：解决办法为增加样品量
　　2样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
　　3样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器
　　4检测器衰减太多：调整衰减即可。
　　5检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数
　　6检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。
　　7检测池中有气泡：解决办法为排气。
　　8记录仪测压范围不当：调整电压范围即可。
　　9流动相流量不合适：调整流速即可。
　　10检测器与记录仪超出校正曲线：解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决?

答：原因可能有：
　　1泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；
　　2比例阀失效，更换比例阀即可。
　　3泵密封垫损坏，更换密封垫即可。
　　4溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；
　　5系统检漏，找出漏点，密封即可。
　　6梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

问：做PGS／MS分析时，如何防止焦油状污染物进入毛细柱?

答：聚合物，尤其是一些含氮、硫及卤素的高分子裂解时，常有焦油状物质产生。为防止这种焦油状物质进入毛细柱造成污染而使柱性能下降，可采用保护预柱，即在裂解器与毛细柱之间接一填充预柱，通过控制预柱温度而使焦油状物质滞留在预柱内，预注可置于GC气化室内，这样既容易控制温度，又减少系统的死体积，当然，预柱填料需经常更换。

分
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