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【转帖】色谱柱使用操作规程-sop

〓猪哥哥〓

2010/01/11

液相色谱（LC）

1.目的：建立色谱柱使用操作规程.
2.范围：适用于仪器分析（HPLC、GC）前对检测条件适用性的确认和HPLC分析结束后对的色谱柱的清洗。
3.责任：QC检验员对本标准实施负责.
4.内容：
4.1. 系统适用性试验的定义：按SOP项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。
4.1.1.色谱柱的理论板数（n）:
n=5.54(tR/Wh/2)2
TR—保留时间，min；
Wh/2—半峰宽高度。
4.1.2.分离度：

tR2—为相邻两峰中后一峰的保留时间；
tR1—为相邻两峰中前一峰的保留时间；
W2及W1—为此相邻两峰的峰宽。
4.1.3.重复性：取各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0％。
4.1.4.拖尾因子：

W0.05h--为0.05峰高处的峰宽；
d1—为峰极大至峰前沿之间的距离；
除另有规定外，T应在0.95—1.05之间。
4.2步骤：
4.2.1.按具体分析方法操作，用流动相走基线约40分钟（正常流速），待基线平稳。
4.1.5.基线平稳后，按要求进系统适用性溶液或对照溶液分析，记录色谱图，进行评估，符合要求后，待测样品。
4.1.6.进样品溶液，记录结果。
4.1.7.测试完毕后，清洗约30min，一般流速为正常测样流速的1至1.5倍，冲洗约40min。
走空白，按1000积分无任何杂质显示。当所测样品杂质在30min后出峰时，走空白时间约为60min。如果有杂质显示，继续清洗至合格为至，并作相应记录。
4.2.5.色谱柱的贮存：
4.2.5.1.防止缓冲溶液和三次水溶液流动相产生微生物，应做到流动相用多少配进多少。含三次水流动相的有效期为3天，不含三次水的流动相的有效期为7天.
4.2.5.2.尽可能将色谱柱贮存于100％有机溶剂中（如：最好用乙腈，其次甲醇），避免在缓冲溶液中保存。
4.2.5.3.使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15-20倍体积的不含缓冲剂的同种三次水-有机溶剂流动相冲洗色谱柱（含不小于5%有机溶剂），后换成100%有机溶剂贮存。
4.3管路的清洗：周期为一月，特殊情况除外（当柱压比正常情况下高30kgf时应立即清洗）.
4.3.1清洗方法：
4.3.1.1色谱清洗完毕后，将色谱柱取下，将泵与检测器直接连接，先用5%HNO3,流速2.0ml/min清洗,压力明显降低为至10kgf以下，时间约1小时.
4.3.1.2再用100%三次水流速2.0ml/min清洗,将管路中酸清洗干净为至，时间约30min.
4.3.1.3最后用100%甲醇2.0ml/min清洗,时间约1小时.
4.4 有关说明：将纯化水进行三次蒸馏后，过滤所到三次水.
5. 变更记录

文件版本号变更内容描述变更依据（参考文献）生效日期页数
OS-ZL-077-0 新增 ICH2000.11.10会议(Q7A) 05-08-26 2页

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第1楼2010/01/11

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