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【求助】人血白蛋白多聚体分析方法求助

frostfish

2010/03/23

液相色谱（LC）

附录Ⅵ Q人血白蛋白多聚体测定法

本法系用分子排阻色谱法测定人血白蛋白多聚体含量。

照分子排阻色谱法（附录Ⅲ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱（SEC，排阻极限300kD，粒度10μm），柱直径7.5mm,长60cm；以含1％异丙醇的pH7.0 0.2mol/L磷酸盐缓冲液［取0.5mol/L磷酸二氢钠200ml、0.5mol/L磷酸氢二钠420ml、异丙醇15.5ml及水914.5ml，混匀］为流动相；检测波长为280nm ；流速为每分钟0.6ml。取每1ml含蛋白质为12mg 的人血白蛋白溶液20μl，注入色谱柱，记录色谱图,人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。

测定法 取供试品适量，用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液,取20μl，注入色谱柱，记录色谱图60分钟~~（色谱柱长60cm~~）。

按面积归一法计算，色谱图中未保留（全排阻）峰的含量(%)除以2，即为人血白蛋白多聚体含量。

计算方法不是很明白，为什么要除以2 ？？？全排阻的峰指的是哪一个？？
谢谢

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有水有渝

第1楼2010/03/23

应助达人

全排阻的峰应该是指除溶剂峰外，最先出来的那个峰，至少为什么这么计算也不明白。

0

柏坡

第2楼2010/03/23

先出来的主峰分子量大的成分。

0

青橙

第3楼2010/03/24

全排阻峰当然指的是除溶剂峰外保留时间最小的峰
除以2会不会是因为多聚体（二聚体）吸收系数是单体的2倍？猜测

0

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