【求助】灭蝇胺可以用气相色谱分析吗？

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看资料是用LC-UV、LCMSMS检测的。

水中灭蝇胺的高效液相色谱测定法
http://www.doc88.com/p-81861559659.html

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附件是灭蝇胺在畜产品中的分析方法。

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蔬菜中灭蝇胺残留的强阳离子交换固相萃取柱净化-液相色谱分析

测定蔬菜中灭蝇胺残留量的方法.蔬菜样品经乙酸胺-乙腈(1:4,体积比)混合溶液提取,强阳离子交换固相萃取(SCX-SPE)柱净化后,采用高效液相色谱仪在波长215nm处测定,所用色谱柱为Agilent NH2,流动相为乙腈-水溶液(97:3,体积比),以1.0 mL/min的流速等梯度洗脱.结果表明,在浓度为0.02～2mg/L范围内,线性相关系数为0.9999.灭蝇胺的添加浓度在0.05～0.4mg/kg范围内,平均回收率为83.4%～104%,相对标准偏差为1.7%～8.4%,均在农药残留测定所允许的范围内.该方法的最低检出限(LOD)为0.02mg/kg,最低检测浓度(LOQ)为0.05mg/kg.

http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_nyxxb200802009.aspx

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蔬菜中灭蝇胺残留量的测定 高效液相色谱法

1．SPE柱：Cleanert SCX(500mg/6ml)

2．试样制备

将蔬菜样本取可食部分，用干净纱布轻轻擦去样本表面的附着物，将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯瓶中于-16 ℃~ -20 ℃条件下保存。称取样本时，常温样本应搅拌均匀；冷冻样本应先解冻再混匀。

1． 样品提取

称取匀浆样本20 g（精确至0.01 g）于150 mL烧杯中，加入50 mL乙酸铵—乙腈溶液（3.4），在14 000 r/min条件均质2 min，滤液经铺有滤纸的布式漏斗抽滤至100 mL具塞比色管中，再用35 mL乙酸铵—乙腈溶液（3.4）涮洗烧杯和均质器刀头，在14 000 r/min条件均质30 s，滤液合并于100 mL具塞比色管中，并用乙酸铵—乙腈溶液（3.4）定容。盖上塞子，将滤液混合均匀。用移液管准确吸取10 mL提取液至150 mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪上（水浴温度40 ℃）浓缩至只含水的溶液，加入少量盐酸溶液（3.5），调节pH = 2，待净化。

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2． 净化

分别用甲醇和水各5 mL预淋活化SCX柱，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即将3步骤中处理好的样品提取液转移至SCX柱中，弃去流出液，再用3 mL盐酸溶液（3.5）清洗圆底烧瓶，转移至SCX柱中，并重复一次。然后分别用水和甲醇各5 mL淋洗SCX柱，弃去淋出液并将小柱抽干。最后依照少量多次的原则，用5 mL 5%的氨水—甲醇溶液（V/V）洗脱SCX柱，收集洗脱液于150 mL圆底烧瓶中，并重复两次。在旋转蒸发仪上（水浴温度40 ℃）浓缩至近干，氮气吹干后用2mL乙腈—水溶液（93：7）溶解蒸残物，过0.45 µm微孔滤膜，待测。



3．色谱条件

色谱柱：Venusil NH₂柱，250 mm×4.6 mm，5µm 流动相：乙腈：水溶液= 97：3

流速：1.0 mL/min 进样体积：10μL 检测波长：215 nm 柱温：35℃

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亲水作用色谱串联质谱测定蔬菜中灭蝇胺及其代谢物三聚氰胺

【摘要】 建立了亲水作用色谱串联质谱测定蔬菜中灭蝇胺及其代谢物三聚氰胺的方法。蔬菜样品匀浆后经甲醇水提取，取适量酸化后提取液经阳离子固相萃取柱净化，洗脱液用氮气吹干，残留物用5 mL流动相定容。采用亲水作用色谱（Hilic）分离，在电喷雾选择反应监测模式下，进行定性和定量分析。以基质校正曲线计算，添加浓度为0.04和0.20 mg/kg时，灭蝇胺的回收率为84.2%～101.3%； 相对标准偏差（RSD）为4.5%～10.7%；三聚氰胺的回收率为72.5%～97.1%； RSD为4.3%～10.8%；灭蝇胺和三聚氰胺的定量限分别为0.01和0.005 mg/kg。利用本方法检测了多种蔬菜样品中灭蝇胺、三聚氰胺的含量。

【关键词】 蔬菜，灭蝇胺，三聚氰胺，亲水作用色谱，串联质谱

1 引 言

灭蝇胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，化学名为N环丙基1,3,5三嗪2,4,6三胺，是强内吸性昆虫生长调节剂[1]。灭蝇胺作为农药已在许多国家取得登记，在我国主要用于防治菜豆、黄瓜、韭菜等蔬菜上的美洲斑潜蝇和潜叶蝇，同时也用于防治食用菌栽培上的菇蚊和菇蝇，是我国农业部推荐的无公害农药。为了保证食用安全，许多国家和地区及国际组织已制定其在农产品中的残留限量。如灭蝇胺在残留限量为：欧盟1 mg/kg，中国和日本0.2 mg/kg。三聚氰胺是灭蝇胺在蔬菜中的主要代谢产物，化学名为1,3,5三嗪2,4,6三胺，各国对灭蝇胺在蔬菜上的残留定义虽未包含其代谢产物，但目前我国存在三聚氰胺在食品中非法添加使用情况，卫生部与其他相关部门已于2008年10月联合发布公告，制定了三聚氰胺在乳与乳制品中的临时管理值。建立同时检测灭蝇胺和三聚氰胺的方法，可用于分析食品链中三聚氰胺的来源和残留状况。

目前，有报道采用气相色谱质谱、液相色谱或液相色谱串联质谱检测灭蝇胺和三聚氰胺，其中关于饲料、奶制品、植物性蛋白及宠物食品中三聚氰胺的检测方法报道较多。灭蝇胺和三聚氰胺为极性化合物，需衍生后才能气化，采用气相色谱质谱检测过程较为烦琐[2]。液相色谱紫外法测定灭蝇胺[3]和三聚氰胺[4]，基质复杂易有较大干扰，且液相色谱法不能作为确证方法。反相液相色谱串联质谱测定灭蝇胺和三聚氰胺，因三聚氰胺保留时间较短[5,6]，需要样品中添加腐蚀性强的三氯乙酸以延长其保留时间[7,8]。亲水作用色谱(hydrophilic interaction chromatography, Hilic)是一种采用极性固定相、以高浓度极性有机溶剂和低浓度水溶液为流动相的色谱模式，对极性碱性化合物有较好的保留，其与串联质谱联用，在药物分析方面已有应用[9]。美国食品药品管理局（FDA）用Hilic色谱串联质谱检测鲶鱼、肉类、婴儿食品等产品中的三聚氰胺[10～1２]。在这些方法的基础上，本实验采用亲水作用色谱与串联质谱联用测定蔬菜样品中的灭蝇胺和三聚氰胺，目标物均有较好的保留，且检测器选择性强，灵敏度高，样品前处理步骤简单，实际样品的检测的结果令人满意。

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2 实验部分

2.1 仪器与试剂

TSQ Quantum液相色谱串联质谱配Survey液相操作系统（美国Thermo Fisher Scientific公司）；Luna Hilic色谱柱（100 mm×2.0 mm,3 μm，美国Phenomenex公司）；IKA T18 basic均质器（美国VWR公司）；固相萃取仪（美国Supelco公司）; Polymer SCX Box阳离子交换柱（6 mL, 150 mg，美国Aglient公司)；MTN2800D氮吹仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；灭蝇胺 (纯度>99.0%， 德国Dr. Ehrenstorfer公司)；三聚氰胺（纯度>99.0%，美国Fluka公司）；乙腈和甲醇（色谱纯，美国Merck公司）；甲酸（色谱纯，美国Tedia公司）；实验用水为去离子水；0.22 μm有机滤膜。

2.2 标准溶液的配制

准确称取灭蝇胺和三聚氰胺各10 mg（准确到0.0001 g），以V(乙腈)∶V(水)=9∶1为溶剂配制成100 mg/L标准储备液，储于冰箱(0～4 ℃)中，保存期1年。用乙腈配制1 mg/L混合标准储备液，保存期3个月。

2.3 提取与净化

以下步骤避免使用塑料制品，以免造成三聚氰胺污染。

称取25 g（精确到0.01 g）试样放入匀浆杯中，加入60 mL V(甲醇)∶V(水)=9∶1混合液，高速匀浆器匀浆提取2 min，布氏漏斗抽滤，滤液收集到具塞量筒中，加入8 mL 0.5 mol/L HCl，并用V(甲醇)∶V(水)=9∶1混合液定容至100 mL。从具塞量筒中吸取10 mL提取液待过柱净化。

用5 mL甲醇和5 mL水预淋阳离子交换柱。上样后，分别用5 mL水和5 mL甲醇洗涤，抽干后用8 mL 5%氨水甲醇洗脱，洗脱液于氮吹仪上40 ℃吹干，最后用5 mL流动相定容，混匀。滤膜过滤后液相色谱串联质谱测定。

2.4 色谱质谱条件

色谱柱柱温：20 ℃；进样量5 μL；流动相：V(乙腈)∶V(0.1%甲酸)=9∶1混合液，流速：表1 灭蝇胺和三聚氰胺的质谱条件参数质谱条件： 扫描方式为电喷雾正离子扫描；检测方式：选择反应监测；喷雾电压：3８00 V；毛细管温度：350 ℃；雾化气: 0.7 L/h；气帘气：0.2 L/h；碰撞气氩气：2.0 Pa。

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　3 结果与讨论

3.1 提取净化条件的确定

灭蝇胺和三聚氰胺均微溶于水，常温下灭蝇胺溶解度为11 g/L，三聚氰胺溶解度为3.3 g/L，是弱碱性化合物。为简化前处理，减少浓缩步骤，采用极性较强的甲醇和水混合溶液提取样品，分取部分酸化后的提取液直接经离子交换柱净化。

灭蝇胺和三聚氰胺的pKa分别为5.2和8.0。为保证待测物在含苯磺酸基团的阳离子交换柱上得到较好保留，提取液pH值应在上柱前调节至低于待测物pKa值2个单位。在样品提取液中加入8 mL 0.5 mol/L HCl并定容至100 mL，测定多种基质提取液的pH值，其变化范围为1.5～2.5，保证基质中的待测物在阳离子交换柱上获得较好保留。

3.2 色谱条件的选择

比较普通反相色谱和亲水作用色谱对三聚氰胺的色谱保留差异。采用Luna C18色谱柱（150 mm × 2.0 mm，3 μm）或极性端基封尾的Synergi HydroRP C18色谱柱（150 mm×2.0 mm，4 μm），后者对极性化合物（如四环素类抗生素）的保留较好。但检测三聚氰胺时，即使采用高比例水相，即V(乙腈)∶V(水)=1∶9，流速为0.2 mL/min，三聚氰胺在反相色谱柱上仍基本无保留，出峰时间小于1.5 min，实际样品检测时易受杂质干扰。而采用Hilic柱（100 mm×2.0 mm，3 μm），以V(乙腈)∶V(0.1%甲酸水溶液)=9∶1为流动相，流速为0.2 mL/min，三聚氰胺的保留时间为3.1 min，稳定性和重复性都较好。实际样品检测时，与干扰杂质的分离度能满足要求。

3.3 线性范围与基质效应分析

用流动相稀释一系列标样，灭蝇胺或三聚氰胺的浓度分别为0.01、0.04、0.08、0.15和0.25 mg/L。以浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标，进行线形回归，灭蝇胺回归方程为Y=36039x+137526，r=0.999；三聚氰胺回归方程为Y=17637x+36310，r=0.999。

本实验分析了黄瓜、蘑菇（食用菌）和韭菜中的基质效应。选择空白样品，按照2.3所述步骤操作，在定容前添加标准物质，使灭蝇胺和三聚氰胺的浓度均为0.01、0.04、0.08、0.15和0.25 mg/L。测定基质标样的响应值，将浓度与响应值进行线性回归。所测3种基质对灭蝇胺或三聚氰胺的电离抑制程度相似，基质标准曲线斜率与溶剂标准曲线斜率相比结果显示：蘑菇、黄瓜和韭菜基质中灭蝇胺的响应为溶剂标样的41%、49%和52%；3种蔬菜基质中三聚氰胺的响应均约为溶剂标样的78%。本实验中，将空白基质稀释100倍后添加标准物质进行分析，

灭蝇胺的响应约为同浓度溶剂标样的60%，三聚氰胺响应约为同浓度溶剂标样的85%。实验表明，通过柱净化，样品中仍存在大量干扰物，通过稀释降低杂质干扰效果不明显，需要利用其它复杂手段如凝胶色谱、二维液相色谱等净化方式才能降低基质干扰，或是采用同位素校正消除基质效应。由于同位素标样价格昂贵，本实验利用基质标准曲线计算目标物含量。

3.4 方法回收率、精密度、检出限和定量限

分别在黄瓜、蘑菇和韭菜3种空白样品中添加灭蝇胺和三聚氰胺，添加浓度分别为0.04和0.2 mg/kg，每个浓度平行5份。 在选定的色谱质谱条件下，分析阳性蔬菜样品中灭蝇胺和三聚氰胺。分别以噪音信号的3倍和10倍计算方法的检出限和定量限。灭蝇胺和三聚氰胺的方法检出限（LOD）分别为0.003 和0.001 mg/kg；定量限（LOQ）分别为0.01和0.005 mg/kg。

3.５ 样品分析结果

随机抽取市场上的40个蔬菜样本（5个韭菜，7个黄瓜，8个食用菌，7个芹菜、4个辣椒、3个番茄、2个芥兰，生菜、白菜、青菜和茄子各1个）进行检测，结果表明，在我国的蔬菜种植中确有使用灭蝇胺，但残留量均未超过相关的限量标准值。芹菜和黄瓜同时检测出灭蝇胺和三聚氰胺，说明三聚氰胺确有可能由灭蝇胺代谢产生。其它样品三聚氰胺残留范围为0.009～0.075 mg/kg，含量低，且同时未检出灭蝇胺，有可能灭蝇胺已完全降解，但也有可能由三聚氰胺迁移引起，三聚氰胺是一种用途广泛的有机化工原料，用作聚乙烯制品的阻燃剂等，在环境中普遍存在。鉴于此，蔬菜中低含量的三聚氰胺残留来源有待进一步研究