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【原创】流式细胞术检测凋亡的技术问题和常见问题解答
gotobio111
2010/04/28
私聊
生命科学仪器综合讨论
1.
附着细胞的凋亡研究:在悬液中的细胞比贴壁细胞更容易发生凋亡,建议在用胰蛋白酶处理前单独收集培养液中悬浮的细胞。
2.
固定剂的影响:在做
DNA
断裂片段分析凋亡细胞时(如
APO-BRDU
、
APO-DIRECT
),要注意使用化学固定剂(如多聚甲醛)固定细胞,使
DNA
交联。原因是:在洗细胞的步骤中,未固定的细胞可能会丢失小的
DNA
片段,而使用化学试剂固定后的细胞,小
DNA
片段就不会丢失。建议做
DNA
断裂片段分析细胞系时,比较不同的固定剂和破膜剂的效果。
3.
为了减少细胞丢失,染色、分析时建议使用
12
′
75mm
聚苯乙烯管。其它类型的试管(如聚丙烯管),会使细胞在管壁堆积,造成细胞丢失,并影响染色效果。洗细胞后,建议轻轻药匀细胞沉淀,避免使用加液枪,以免由于塑料枪头的使用造成细胞损失。
4.
洗细胞时应注意应洗到管壁内侧细胞可能附着的位置,使细胞充分悬浮。这样可以避免在随后的染色步骤中,由于细胞贴壁或悬着不充分,造成细胞染色不均一。如果细胞染色不均,在荧光参数分析时,表现为双峰现象,即多出一群着色弱的细胞。
5.
做
APO-BRDU
或
APO-DIRECT
分析时,若发现染色荧光弱,可以适当延长
BrdU
掺入反应的时间。一些细胞的反应时间可以到
37
°
C 4
小时。
6.
做
APO-BRDU
或
APO-DIRECT
分析时,可以结合
PI
染色,研究凋亡与细胞
DNA
周期的关系。
分
该帖子已被
版主-bigbearbigbear
加5积分,加2经验;加分理由:原创
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私聊
titi
第1楼
2010/04/28
这个是楼主根据自己的经验心得原创的内容吗?如果是那就给您加分奖励哦~
0
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