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【原创】极限体验之利用月旭柱和薄层色谱来选择流动相

  • chqiu111111
    2010/05/23
  • 私聊

厂商论坛

  • 月旭柱型号:XB-C185μm4.6*250mm



    我在用月旭柱在测定一个混合物,之前我是不知道到底混合物中是有什么物质,所以用4pH的来做对物质液相条件进行摸索。这里的进样物质全部是一个样品,此进样物质的混合物且全部是酸性物质,可能水溶液在ph3左右会沉淀出来。由于现在还是处于摸索阶段,所以物质我也不确定,没有对照品,所以请各位见谅,我只拿出来把我的思路和不懂的地方一起学习,探讨!
    流动相:25mmol ph8的磷酸盐缓冲液:乙腈=955



    1、此时出现的是3个大峰。说明在这个情况下,有3个主要的物质。

    流动相:25mmol ph5的乙酸钠缓冲液:甲醇=8020


    2、此时除了前面3个峰之外,在9分钟左右又出现了一个大峰。



    流动相:25mmol ph5的乙酸钠缓冲液:甲醇=9010


    3、此时除了前面3个峰之外,在9分钟左右又出现了一个大峰。此时与图2相比,只是甲醇的比例不同而已,但是9分钟出峰的峰面积却完全不同,我不懂为什么会出现这种状况。请各位高手指教。

    流动相:25mmol ph3.5的磷酸盐缓冲液:乙腈 =955


    4、此时中间2-6分钟只有一个峰,却出现了新的峰,0.8分钟和11分钟。不懂是什么原因引起的,我猜想,是不是因为这个柱子的填料把我的物质吸附了啊?



    流动相:10mmol ph8的乙酸铵缓冲液:乙腈 =955



    5、此时流动相的PH和图1一致,峰也差不多一致。



    后面我不确定用哪个是比较准确的流动相,所以想通过其他的方法来确定。所以后面我用3种不同的溶剂来展开,点板。出现了3个主斑点,且比移值相差不大,这里板没有拍照,所以就没有照片了哈。所以我确定选择pH8的时候是正确的。我也不懂到底对否,希望各位高手指点一下。



    我现在不懂的地方主要是:为什么流动相pH不同会影响这么大,我的意思是按照道理,应该是不管流动相ph是多少,主峰的个数是一样的,但是现在却不同,是由于什么原因呢?是因为物质与硅胶结合了吗?还是其他的原因?根据图1和图2来看,为什么图29分多钟还会出现一个大峰呢?
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  • lingshike

    第1楼2010/05/25

    呵呵,所以说高端仪器还是得配上普通仪器方法才能更好地进行分析实验。

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  • huaibeijiayuan

    第2楼2010/05/25

    会不会是样品残留呢,PH调整后,强保留物质被洗脱出来了

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  • tianhaikuo

    第3楼2010/05/25

    流动相ph不同,其极性就不同,对相同物质的洗脱能力或保留能力也不同。

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  • laibuxyf

    第4楼2010/05/25

    不错不错,初来乍到的,多多提拔丫

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  • chqiu111111

    第5楼2010/05/25

    我不知道,找了很久的原因,都不懂为什么,会不会是因为硅胶与我的物质结合在一起了啊?后面我一直用醇洗脱,都没有东西出来。

    huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:会不会是样品残留呢,PH调整后,强保留物质被洗脱出来了

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  • chqiu111111

    第6楼2010/05/25

    这个肯定是有影响的,不过峰的个数不一样,说明物质也不一样,但是我是同一个样品的啊?不懂是何原因

    tianhaikuo(tianhaikuo) 发表:流动相ph不同,其极性就不同,对相同物质的洗脱能力或保留能力也不同。

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  • 东风恶

    第7楼2010/05/26

    建议结合您的合成工艺,参考相关文献,对起始原辅料进行相应的分析,可以用DAD检测器扫描光谱图,还有您的中间体。
    根据您的合成工艺初步判断可能产生的物质来慢慢摸索。

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  • chqiu111111

    第8楼2010/05/26

    恩,这个我试过了,不同条件的ph峰型不一致所以就没有显示出来啊。

    东风恶(luoleqc) 发表:建议结合您的合成工艺,参考相关文献,对起始原辅料进行相应的分析,可以用DAD检测器扫描光谱图,还有您的中间体。
    根据您的合成工艺初步判断可能产生的物质来慢慢摸索。

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  • 毛毛儿

    第9楼2010/05/27

    应助工程师

    如果不知道待测物的性质,盲目改变色谱条件,也不一定能成功啊!

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  • zxhcnf

    第10楼2010/05/27

    首先感谢楼主的辛苦,让我们一起分享您的经验,谢谢!
    您这个应该属于方法开发,方法开发的过程通常是按这样一个顺序来进行的:
    1. 首选C18柱;
    2. 确定检测波长,如果波长不能很好的确定,则选用210nm,用乙腈和水的体系来进行初步的实验;
    3. 先用纯乙腈(如果波长确定了,并且甲醇不会带来本底影响时,首选甲醇)来做流动相,看它的总的峰高和峰面积是怎么样的;因为这么强的洗脱能力,通常会把所有的组分都洗脱出来,那你就清楚总体是个什么样子了。
    4. 然后再将流动相中乙腈的比例10%的量递减,看谱图里面峰会出现什么样的变化,如从纯乙腈做流动相变为乙腈:水=90:10时,会多出来几个峰?峰大不大?峰朝哪个地方移动?这样10%的变化,一步一步的,流动相从纯乙腈变道纯水,你就可以大致的知道,你的样品有几种物质,这些峰从哪个峰里面分出来的,这些峰的来龙去脉都弄得清清楚楚。(当然,有梯度泵就简单多了,用不着10%的量来调)
    5. 选一个认为分得比较好的条件,再来调节pH,分开后,再来想办法调整峰形。

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