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第10楼2010/05/27
首先感谢楼主的辛苦,让我们一起分享您的经验,谢谢!
您这个应该属于方法开发,方法开发的过程通常是按这样一个顺序来进行的:
1. 首选C18柱;
2. 确定检测波长,如果波长不能很好的确定,则选用210nm,用乙腈和水的体系来进行初步的实验;
3. 先用纯乙腈(如果波长确定了,并且甲醇不会带来本底影响时,首选甲醇)来做流动相,看它的总的峰高和峰面积是怎么样的;因为这么强的洗脱能力,通常会把所有的组分都洗脱出来,那你就清楚总体是个什么样子了。
4. 然后再将流动相中乙腈的比例10%的量递减,看谱图里面峰会出现什么样的变化,如从纯乙腈做流动相变为乙腈:水=90:10时,会多出来几个峰?峰大不大?峰朝哪个地方移动?这样10%的变化,一步一步的,流动相从纯乙腈变道纯水,你就可以大致的知道,你的样品有几种物质,这些峰从哪个峰里面分出来的,这些峰的来龙去脉都弄得清清楚楚。(当然,有梯度泵就简单多了,用不着10%的量来调)
5. 选一个认为分得比较好的条件,再来调节pH,分开后,再来想办法调整峰形。