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【讨论】关于Agilent的阀的疑惑(图文)

液相色谱(LC)

  • 是阀的问题还是其他原因目前还不是很明朗,总之这几天遇到的一些问题想在这里说下,希望版友能给出意见。

    都说“盐析出”以往对这个概念理解的不是很透彻,因为遇到的情况少。
    情况1:
    机器是新的1200 低压四元,当使用两个通道进行在线混合分析时,出现柱压不稳,压力曲线出现无规律间隔的倒峰现象,流动相是 55缓冲盐:45甲醇 柱压190bar左右,基线是平的,柱压波动40bar左右(瞬间降低40bar后逐步恢复到190bar)这个色谱条件下 测得保留时间和峰面积都有较大偏差。
    分析原因:主动阀闭合不好有泄漏或盐析出造成的主阀闭合不严;系统有污染造成压力不稳定。
    色谱条件:磷酸二氢钾6.8g入1000ml水中调节PH至7.0与甲醇混合(55:45)
    在线混合双通道,分析样品如下图:


    走基线情况:红色为压力曲线,蓝色为基线(正常波动不明显)

    基线稳了,压力又不稳了。
    情况2:
    梯度表:

    40分钟梯度压力曲线图:

    按上述梯度进行测试后,发现前10分钟(柱压小于120bar)压力无倒峰波动,后30分钟(190bar)出现到峰波动。
    问题:为什么高柱压下才有压力波动现象?即使是主动阀闭合不严?

    情况3:
    单独运行一个通道 都无压力波动现象很稳定,真的是盐析出造成的吗?
    切换单通道时:


    情况4:
    醋酸铵0.77g入1000ml水三乙胺调节PH5.07与乙腈混合。
    醋酸铵缓冲盐:乙腈=40:60 两个通道在线混合 等度洗脱,出现基线不稳现象,随有机相比例提高而增大。基线呈小波浪状 密集 幅度不大。压力无异常波动(1bar左右)
    同样的比例 预混流动相后无基线波动现象。压力无异常波动(1bar左右)


    放大后:


    压力稳了基线又不平了。

    分析原因:在线混合不均匀或有盐析出,混合后有气泡产生?

    问题:情况4的方法在其他机器上应用无问题,A的机器第一次做,难道以后只能预混后再做吗?高比例有机相的缓冲盐不能用多通道在线混合吗?

    综上遇到的几种问题,高比例有机相的缓冲盐在这台机器上不合适还是仪器本身有问题?

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  • 有水有渝

    第1楼2010/05/28

    应助达人

    我觉得可能是脱气不完全或主动阀关闭不全,单向阀清洗过了没有?

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  • 老多_小多

    第2楼2010/05/28

    看下pandora98 专家的讲座,好像讲到过用压力曲线分析问题
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20090707/1993135/

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  • pandora98

    第3楼2010/05/28

    盐的浓度??是色谱级的么??压力曲线贴上来看看。
    根据我的经验,1200用20mM的缓冲盐是没有任何问题的,但是如果使用了分析纯或者不太可靠的盐,而又没有过滤,可能会有你所提出的问题发生。一般这种问题都是单向阀上有固体颗粒,多为盐带入的机械杂质,出口单向阀出现问题的几率要比入口单向阀的高,解决办法:
    1.流动相过滤使用,最好是用0.2um的膜
    2.仪器用异丙醇排空冲洗,排空可以加大流量,提高效率。
    3.异丙醇冲洗无效时把单向阀拆下来超声。

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  • 柏坡

    第4楼2010/05/28

    A的主动阀洗起来不很容易,拆的麻烦。脱气应该没问题,超声。

    有水有渝(xky0230699) 发表:我觉得可能是脱气不完全或主动阀关闭不全,单向阀清洗过了没有?

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  • 柏坡

    第5楼2010/05/28

    流动相过滤是不可少的,缓冲盐嘛我们是优级纯,以往都用这个,换岛津20A没出现过这个情况。出口和入口阀我都没有清洗,就是加大水相冲了,效果还行。

    pandora98(pandora98) 发表:盐的浓度??是色谱级的么??压力曲线贴上来看看。
    根据我的经验,1200用20mM的缓冲盐是没有任何问题的,但是如果使用了分析纯或者不太可靠的盐,而又没有过滤,可能会有你所提出的问题发生。一般这种问题都是单向阀上有固体颗粒,多为盐带入的机械杂质,出口单向阀出现问题的几率要比入口单向阀的高,解决办法:
    1.流动相过滤使用,最好是用0.2um的膜
    2.仪器用异丙醇排空冲洗,排空可以加大流量,提高效率。
    3.异丙醇冲洗无效时把单向阀拆下来超声。

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  • 柏坡

    第6楼2010/05/28

    190bar走基线是这个样子的:


    没有规律。

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  • pandora98

    第7楼2010/05/28

    高压系统闭合不严,有没有发现什么地方漏液??有没有做过压力测试??
    有可能是新仪器有些地方的螺丝没有拧紧,导致系统在压力较高的时候出现泄露,这个可以在诊断界面里做以下压力测试来看看

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  • pandora98

    第8楼2010/05/28

    6.8g磷酸二氢钠大概就是50mM,浓度有点高,你试过20mM的么??

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  • 1818

    第9楼2010/05/28

    看样子,好像是流通池被污染了!!

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  • dongyuzhang520

    第10楼2010/05/28

    或许是缓冲盐浓度太大造成的,两相瞬间混合可能有盐析出,造成压力不稳的,两个办法解决:
    1. 降低盐的浓度;
    2. 两相混合后再进液相

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