【求助】关于HPLC的梯度问题

不知你的流动相的比例，样品出峰快应减小乙腈的比例。

在反相色谱中 ，流动相的极性越弱， 其洗脱能力越强，样品出峰越早。乙腈水溶液中，乙腈比例越大，极性越弱 洗脱能力越强。所以你可以先用5%的乙腈水溶液分析样品，在慢慢调节流动相比例。如果还是不行的话，有机溶剂可改用极性稍强的甲醇作流动相。
另外，流动相流量也会影响出峰时间，流量越大出峰时间越早。你可以用较小流量来分析样品，如0.5ml/min。
还有柱温也会影响出峰时间，柱温也高，出峰越快。你可以在室温下分析样品。流动相PH 也会影响出峰时间，可以调节缓冲盐ph来提高分离度。
如果以上方法都不行，你只能换柱子了。

如何提高分离度
可以参考 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100104/2315910/

调整pH值，换用甲醇，减小流速，换用C8柱，试试吧！要根据化合物结构来判断！

走的是梯度，乙腈是从1%到26%，其余是水，如果样品极性大，是不是应该增大乙腈的比例呢？

如果极性特别强，恐怕要换柱子了，不是靠调节流动相能实现的。