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【求助】请大家帮我分析一下流动相

液相色谱（LC）

  • 大家好：
    首先我是液相新手，所以请多多帮助。
    我的样品是小分子蛋白，分子量5000左右。前面摸了一下条件，波长214nm，流动相可以用A：0.2molNaCl，磷酸调ph=3和B：乙腈走梯度初步分开。现在我要在流动相中加入缓冲溶液，我先用了0.2mol醋酸铵，醋酸调ph=3。结果我样品的吸收值变得非常小，严重影响峰高和峰面积，也无法考察分离度是否有改善了。所以我想可能是醋酸铵体系影响了我样品的吸收值，大概不适合这个样品分离吧。于是我换成0.1mol柠檬酸钠，柠檬酸调ph=3。可结果还是吸收值很小，峰高和峰面积都很小。和醋酸铵体系的谱图比较一下，我的样品在两个体系里差不多。
    这一下搞得我好糊涂，不知道原因出在哪了，更不知道实验该怎么进行了。请大家帮我分析一下，给我点建议，我将感激不尽。
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    +关注 私聊

  • 毛毛虫

    第1楼2010/07/06

    你用磷酸二氢钠和磷酸做缓冲体系试试吧

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  • ronda

    第2楼2010/07/06

    好的，多谢！能再帮我解释一下为什么样品吸收值会减小呢？我以后也好避免一下。

    acic_zyf(acic_zyf) 发表:你用磷酸二氢钠和磷酸做缓冲体系试试吧

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    +关注 私聊

  • 毛毛虫

    第3楼2010/07/06

    你先用这个体系试试看，可能是因为不同的体系可能影响样品的吸附和沉淀等.

0
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  • yanghaichao0

    第4楼2010/07/06

    首先最好不要用氯化物做流动相；其次注意PH值不要过低

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  • happy王子矜

    第5楼2010/07/06

    醋酸铵和柠檬酸在这个波长下背景吸收高的很。

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  • guoke121

    第6楼2010/07/07

    醋酸铵和柠檬酸的截止波长是230左右，远远大于你样品的吸收波长（214），所以你的色谱图上的峰高很低。

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