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【分享】分子生物学常用溶液配制

分析化学



  • 分子生物学常用溶液配制



    一、分子生物学常用贮存液的配制

    130%丙烯酰胺溶液

    【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g NN’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37溶解之,补加水至终体积为100ml。用滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。

    【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。

    一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。

    在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。

    240%丙烯酰胺

    【配制方法】把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20g NN’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L

    【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。

    3.放线菌素D溶液

    【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20

    【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

    药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。

    40.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

    【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70

    510mol/L乙酸酰溶液

    【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。

    610%过硫酸铵溶液

    【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4保存数周。
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  • 儒雅凤

    第1楼2010/07/06

    7BCIP溶液

    【配制方法】把0.5g5--4--3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4

    82×BES缓冲盐溶液

    【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[NN-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]1.6g NaCl0.027g Na2HPO4,室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20

    91mol/L CaCl2溶液

    【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20

    【注意】制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0

    102.5mol/L CaCl2溶液

    【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20

    111mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液

    【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20

    【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。

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  • 儒雅凤

    第2楼2010/07/06

    12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液

    【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/LdNTP,分装成小份贮存于-70

    碱基

    波长(nm

    消化系数(ε[L/mol·cm]

    A

    259

    1.54×104

    G

    253

    1.37×104

    C

    271

    9.10×103

    T

    260

    7.40×103



    比色杯光径为1cm,吸光度=εM

    130.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

    【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na·2H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节溶液的pH值至8.0(约需20g NaOH颗粒)然后定容至1L,分装后高压灭菌备用。

    【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。

    14.溴化乙锭(10mg/ml溶液)

    【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。

    【注意】小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。

    152×HEPES缓冲盐溶液

    【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl0.074g KCl0.027g Na2PO4·2H2O0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20

    16IPTG溶液

    【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20

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  • 儒雅凤

    第3楼2010/07/06

    171mol/L乙酸镁溶液

    【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1L过滤除菌。

    181mol/L MgCl2溶液

    【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2·6H2O,用水定容至1L,分装成小份并高压灭菌备用。

    【注意】MgCl2极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放。

    19β-巯基乙醇(BME)溶液

    【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于4

    【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。

    20NBT溶液

    【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4

    21.酚/氯仿溶液

    【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH=7.6)液层,保存于4

    【注意】酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。

    2210mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

    【配制方法】用异丙醇溶解PMSF1.74mg/ml10mmol/L),分装成小份贮存于-20。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/L)。

    【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

    PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25的失活速率高于4pH值为8.0,20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。

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  • 儒雅凤

    第4楼2010/07/06

    23.磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液

    【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl0.2g KCl1.44g Na2HPO40.24g KH2PO4,HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。

    241mol/L乙酸钾(pH=7.5)溶液

    【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中,用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L,保存于-20

    25.乙酸钾溶液(用于碱裂解)

    【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

    263mol/L乙酸钠(pH5.2pH7.0)溶液

    【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0,加水定容到1L,分装后高压灭菌。

    275mol/L NaCl溶液

    【配制方法】

    800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L,分装后高压灭菌。

    2810%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液

    【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS,加热至68助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分装备用。

    【注意】SDS的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS10%SDS溶液无须灭菌。

    2920×SSC溶液

    【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl88.2g柠檬酸钠,加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

    3020×SSPE溶液

    【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl27.6g NaH2PO4·H2O7.4g EDTA,NaOH溶液调节pH值至7.4(约需6.5ml 10ml/L NaOH,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

    31100%三氯乙酸溶液

    【配制方法】在装有500g TCA的瓶中加入227ml水,形成的溶液含有100%M/VTCA

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  • 儒雅凤

    第5楼2010/07/06

    321mol/L Tris溶液

    【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris,加入浓HCl调节pH值至所需值。

    pHHCl 7.4 70ml 7.6 60ml 8.0 42ml

    应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

    【注意】如1mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的Tris

    尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值,但仍可向大多数厂商购得合适的电极。

    Tris溶液的pH值因温度而异,温度每升高1pH值大约降低0.03个单位。例如:0.05mol/L的溶液在525、和37时的pH值分别为9.58.98.6

    33Tris缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/l Tris

    【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl0.2g KCl3g Tris碱,加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4,用蒸馏水定容至1L,分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min,于室温保存。

    34X-gal溶液

    【配制方法】

    X-gal5--4--3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中,装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于-20X-gal溶液无须过滤除菌。

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  • 儒雅凤

    第6楼2010/07/06

    二、常用抗生素溶液


    抗生素

    贮存液a

    工作浓度

    浓度

    保存条件

    严紧型质粒

    松弛型质粒



    氨苄青霉素



    50mg/ml(溶于水)

    -20

    20μg/ml

    60μg/ml



    羧苄青霉素



    50mg/ml(溶于水)

    -20

    20μg/ml

    60μg/ml



    氯霉素



    34mg/ml(溶于乙醇)

    -20

    25μg/ml

    170μg/ml



    卡那霉素



    10mg/ml(溶于水)

    -20

    10μg/ml

    50μg/ml



    链霉素



    10mg/ml(溶于水)

    -20

    10μg/ml

    50μg/ml



    四环素b



    5mg/ml(溶于乙醇)

    -20

    10μg/ml

    50μg/ml



    a:以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

    b:镁离子是四环素的拮抗剂,四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB培养基)。

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  • 儒雅凤

    第7楼2010/07/06

    三、常用的电泳缓冲液

    缓冲液

    使用液

    浓贮存液(每升)



    Tris-乙酸TAE



    0.04mol/L Tris-乙酸



    50×242g Tris



     



    0.001mol/L EDTA



    57.1ml冰乙酸



     



     



    100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)



    Tris-磷酸TPE



    1×:0.09mol/L Tris-磷酸



    10×:10g Tris



     



    0.002mol/L EDTA



    15.5ml85%磷酸(1.679g/ml



     



     



    40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)



    Tris-硼酸TBEa



    0.5×0.045mol/L Tris-硼酸



    54g Tris



     



    0.001mol/L EDTA



    27.5硼酸



     



     



    20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)



    碱性缓冲液b



    1×:50mmol/L NaOH



    1×:5ml 10mol/L NaOH



     



    1mmol/L EDTA



    2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)



    Tris-甘氨酸c



    1×:25mmol/L Tris



    5×:15.1g Tris



     



    250mmol/L 甘氨酸



    94g 苷氨酸(电泳级)(pH8.3



     



    0.1% SDS



    50ml 10% SDS(电泳级)

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  • balagui0720

    第8楼2010/07/07

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