johne0212
第4楼2010/07/21
这么长时间了,终于碰到了一个和我以前做一样东西的人了,你用谁的电化学检测器呢? ESA CoulochmeIII, Dionex, 还是Antec?
Firstly,第一个问题神经递质都是不稳定的,以前给西安什么军医大学做样品的时候,要求所有的样品在神经透析以后都用液氮冻起来直到开始到HPLC-ECD分析.另外,不知道你的HPLC体系中AS是否带制冷功能,我们一般要求做Neurotransimetter的时候都需要制冷进样的。
Secondly,你可以不用找空白血浆作标准曲线,知道内标法的原理吗?不知道你要分析的儿茶酚胺都包括哪些, NA,DA,5-HT,5-HIAA,DOPAC,HVA选一个你基质中没有的作为内标一起处理就可以了。因为内标法会补偿你不同基质和处理方法造成的回收率的影响。
majinfei8
第5楼2010/07/21
谢谢楼上两位专家的回答,我还有几点疑问:
1、我们的电化学还在购买中,主要为ESA和Antec两家,不知道哪家是否更适合做这个项目?
2、我们研究的主要是血样和尿样,如果样品在神经透析以后都用液氮冻起来直到开始到HPLC-ECD分析,操作起来会不会有很大难度。因为我们这个项目比较大,到时样品数目、比较多,我看到文献有采用加入10%的偏重亚硫酸钠的方法来解决血浆稳定性这个问题,不知是否可行?
3、按JOHNE0212的说法,我是否可以理解为可以通过直接进标准溶液的方法来绘制标准曲线(只要加入内标溶液即可)。那麽通过这种方法就只能计算方法的加样回收率,因为儿茶酚胺是内源性的。我对电化学了解不多,但是以前做过液质,知道不同基质对待测物响应是不一样的,即使采用内标法进行测定,但如果其中有一种物质(待测物或内标)存在基质效应的时候,就会影响结果的准确度。我没做过电化学,不知道不同的基质会不会影响响应。
希望专业人士能帮我解答一下,非常感谢!我的邮箱majinfei8@126.com.
johne0212
第6楼2010/07/24
不好意思,刚刚看到您的回复,首先液氮冷冻不麻烦的,我说真的很快很方便
第二个问题,你说的很好,内标法就是考虑到基质效应所以才产生的,因为你分析的物质会和内标一样都被基质抑制或者增强,并且他们被抑制或者增强的倍数都相同。另外来说你说的内源性是一个很现实的问题,但是这个我们到目前为止没有办法解决,只能通过外源性的添加去尽量接近我们要的真实结果,相信你对质谱的内标都有一定程度的了解,内标法和外标法考虑到基质效应后得到的结果有时候会相差很大的,这时候还是相信内标法会更准确。
majinfei8
第7楼2010/07/26
您好!非常感谢您的回答。个人觉得存在基质效应的时候,可能会出现以下几种情况:
1、待测物和内标均存在离子抑制的情况,而且基质效应大小一致。
2、待测物和内标均存在离子增强的情况,而且基质效应大小一致。
3、待测物存在离子抑制的情况,而内标均存在离子增强的情况。
4、待测物存在离子增强的情况,而内标均存在离子抑制的情况。
做液质联用的时候,只要待测物和内标在不同浓度下(一般为低中高三个浓度)的基质效应一致,存在一定的基质效应是不会影响测定结果的。
但是,在本实验中中,空白血浆的获得是一个难题,所以如何来测定是否存在基质效应?既然无法测定的话又如何能用溶液代替空白血浆来制备标准曲线?
恳请专业人士给予解答。