【求助】求助：用HPLC定量,得出无法解释的结果？

首先这位战友的计算好像是有点问题：根据线性公式10ul的进样量的峰高应为922.5,10ul的进样量相当于5ug样品，因此，兄弟实测峰高为1280.1，计算出的样品量应该为1280.1/922.5*5=6.94ug。所以，你算的32ug不知道你怎么算的。
其次，兄弟做线性的方法个人觉得不是很准确，一般的做法为峰面积或峰高对样品的浓度进行线性回归，你应该配制不同浓度的样品，统一进样量然后做线性。因为你用微量注射器定量本身就不准确。
最后，你的色谱条件也不是很好，应该先看下重复性是否能够满足要求。

对，为什么不配置不同浓度的标样进同样的体积？还有就是你这个线性实在不好，估计这个也对你结果造成了较大的影响，重做吧，你这个方法既不简洁又不准确。

以下是做标曲的原始数据
5 721.2
7.5 861.3
10 945.4
12.5 1011.8
15 1090.7
25 1373.9



HPLC整个过程采用梯度洗脱，条件是:
time(min) 乙腈（%） 0.05%三氟乙酸（%）
0 10 90
8 18 82
8.1 100 0
12 100 0
15 10 90

210nm检测

是3min的那个很高的峰

请问如何让出峰时间延迟呢？

请问什么叫“样品好像在死体积附近”，我应该怎么改进方法呢？
“改善分离条件，如使用离子对是试剂 ...”请问什么是“离子对是试剂”呢？

标准曲线的横坐标是表示A物质的质量，我的计算过程是
（1280.1-609.64）/31.286=21ug
刚才，把一楼的结果写错了，已经改过来了，呵呵
不过还是21ug〉5ug，请大家再帮我想想这是为什么呢？

应助达人

楼主做的是什么，该物质都有哪些理化性质，这些信息不知道，很难选择色谱条件。