【求助】请教：液相 检测出现问题！

基线走的很不稳啊，是13.8min左右的峰吗？
你计算时的稀释倍数搞清楚了没？

以下是做标曲的原始数据
5 721.2
7.5 861.3
10 945.4
12.5 1011.8
15 1090.7
25 1373.9



HPLC整个过程采用梯度洗脱，条件是:
time(min) 乙腈（%） 0.05%三氟乙酸（%）
0 10 90
8 18 82
8.1 100 0
12 100 0
15 10 90

210nm检测

是3min的那个很高的峰

请问如何让出峰时间延迟呢？

请问什么叫“样品好像在死体积附近”，我应该怎么改进方法呢？
“改善分离条件，如使用离子对是试剂 ...”请问什么是“离子对是试剂”呢？

标准曲线的横坐标是表示A物质的质量，我的计算过程是
（1280.1-609.64）/31.286=21ug
刚才，把一楼的结果写错了，已经改过来了，呵呵
不过还是21ug〉5ug，请大家再帮我想想这是为什么呢？

1.感觉好像是浓度配制错了。如果对照品和样品一起配错了，标准曲线的横坐标就是错的，结果肯定有问题。
2.A在柱子上没什么保留，在死体积出峰。可以尝试将梯度起始时间的水相调整为0，从100%的水相开始变化，A峰的保留时间应该会增加。

我觉得问题出在你的目标峰出在死时间附近的，线性是很不好的，R2=0.98就说明这个问题，赞成4楼的意见，调流动相，如果可以的话换根长点的柱子。降低柱温，还有的话进针溶剂扣下空白，再做曲线看看。还是推荐采用峰面积作曲线。

一、你的标准品含量100%的吗？
二、按照你的峰高看是在结果20μg左右的，这个应该不会错
三、用外标法以峰面积计算可以吗？
四、配样为什么不一次配好？还移液一次就不是很精确了，25mg到50ml不可以吗？

进样量不对，配置标准品时，应配置不同浓度而进样量相同。如果定量环是20ul你进25ul、30、50都是20ul而且5ul、10ul、15ul、20ul在进样中并不成比例