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【求助】关于检测核苷酸的难题

去年冬天

2010/08/17

紫外可见分光光度计（UV）

请教各位，近期俺要设计一个实验，但经过4、5天反复思考和查资料都没有找到太好的方案，遂进来赐教！
是这样的，有一个混合样品，已知里面含有蛋白质（少量）、多肽和游离氨基酸（占绝大部分≥50%）、核苷酸（可能有三种存在形式：核苷、核苷酸、碱基）、还有其他可溶性化合物质。
要求：检测样品当中核苷酸的含量。
疑难：由于样品中多肽和游离氨基酸含量较多，遂不能用紫外分光光度计法测量（蛋白质和核苷酸的吸光峰值很相近，只有在蛋白质含量（包括蛋白质、多肽和游离氨基酸）较少的情况下用此法才准确）。
我的思路是，先把多肽和游离氨基酸与核苷酸分离开，然后再用紫外分光光度计法测量核苷酸含量。但本人才疏学浅，不知用什么方法才能把两者分离开。请各位赐教~~

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初学者&九点虎

第1楼2010/08/18

其实我觉得用液相-紫外检测器最好，如果楼主手头有的话，是首选

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初学者&九点虎

第2楼2010/08/18

至于分离，首先可以考虑采用蛋白质的等电点来考虑，通过调节PH来让蛋白质沉淀

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初学者&九点虎

第3楼2010/08/18

也可以考虑离心的方法，看是否能分离

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初学者&九点虎

第4楼2010/08/18

最后考虑加入沉淀剂，因为一般加入沉淀剂也可能会沉淀目标组分

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初学者&九点虎

第5楼2010/08/18

楼主做这方面实验，看来是高手，有机会多请教

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初学者&九点虎

第6楼2010/08/18

最后，如果确实分不开，可以考虑二阶导数对谱图进行处理，看能否消除蛋白质的干扰

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鸿雁

第7楼2010/08/23

二虎的回答也很精彩啊，一看就是经验十足

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初学者&九点虎

第8楼2010/08/24

还不知道楼主做的怎么样了
鸿雁(3859085) 发表:二虎的回答也很精彩啊，一看就是经验十足

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