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【求助】急求!关于区带毛细管电泳不出峰的问题

  • wjtang8498
    2010/08/30
  • 私聊

毛细管电泳(CE)

  • 求助高手:最近在做一种含有吡啶环结构的农药的区带毛细管电泳,用的标样是溶解在甲醇中的,条件摸索很久,包括缓冲液尝试了磷酸盐,硼砂,醋酸,也尝试加SDS,检测波长也换过,但一直没出过一点峰,很是费解,这农药用高效液相也可以出峰,含有吡啶环,应该不用衍生化的,不知道哪里出了问题?是缓冲液问题么?(是不是需要加有机溶剂?)还是管子的问题?
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  • lisa_a

    第1楼2010/08/30

    我建议一下几点:
    第一,看波长有没有选对;第二,更换bufferpH值,最好用磷酸缓冲液进行摸索,第三,最好用电泳buffer溶解样品,第四,检查仪器的光缆,不知你用的是那种仪器及检测器。

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  • wjtang8498

    第2楼2010/08/30

    我用的标样微溶于水,是溶解在甲醇中的,这样也能用电泳buffer溶解样品么?我用的是贝克曼的,检测器是UV ,新手上路,敬请各位高手指教

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  • userwzy

    第3楼2010/08/31

    另外,你还要确定一下,样品能不能从检测段出来,是不是迁移时间太长了。

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  • merry11

    第4楼2010/09/02

    我也碰到同样的问题,我的可能是检测器的问题,灯时间用长了。不过具体是怎么回事还在探索中,楼主要是找到问题所在了,分享一下。
    还有顶一下此贴,希望各位专家多多提点啊。

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  • sunpengwjh

    第5楼2010/09/02

    优化一下pH值,还有用的是裸柱吧?最佳的检测波长没有问题吧?

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  • wjtang8498

    第6楼2010/09/02

    磷酸盐,醋酸,硼砂都试过,PH我从4-9都用过了 前几天我把样品也溶解在Tris里面里面的,波长的话以前从220-300都试过,迁移时间也考虑过,1个小时都没峰,检测器的问题倒是没考虑,如何判断里面的氘灯寿命到了呢?我前几天用丙酮还跑出很明显的特征峰了,应该不会是灯的问题吧,标准样品浓度是1mg/ml,我稀释10倍、100倍都试过 难道稀释10倍变成100ug/ml也算低么 应该不会吧,该农药样品国标是气相,高效液相也有很多人做过,但没有毛细管的,摸索起来真难,真费解到底哪地方有问题,就算条件不是最优,至少有个峰吧,连个念想都不给,崩溃中。。。

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  • sunpengwjh

    第7楼2010/09/02

    没有加什么特殊的东西,应该不会形成反向电渗流,是不是样品吸附在管壁了呢?

    wjtang8498(wjtang8498) 发表:磷酸盐,醋酸,硼砂都试过,PH我从4-9都用过了 前几天我把样品也溶解在Tris里面里面的,波长的话以前从220-300都试过,迁移时间也考虑过,1个小时都没峰,检测器的问题倒是没考虑,如何判断里面的氘灯寿命到了呢?我前几天用丙酮还跑出很明显的特征峰了,应该不会是灯的问题吧,标准样品浓度是1mg/ml,我稀释10倍、100倍都试过 难道稀释10倍变成100ug/ml也算低么 应该不会吧,该农药样品国标是气相,高效液相也有很多人做过,但没有毛细管的,摸索起来真难,真费解到底哪地方有问题,就算条件不是最优,至少有个峰吧,连个念想都不给,崩溃中。。。

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  • wjtang8498

    第8楼2010/09/03

    吸附管壁我也考虑过,加了SDS 没效果啊 而且一点峰没有 即使吸附也不会一点峰都没吧 至少换新管子的时候会出吧 我换了管子也一样的

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  • ericwong

    第9楼2010/09/03

    新毛细管的内壁吸附可能更严重。加了SDS,似乎对改善内壁吸附没什么效果。
    没有出峰,有可能是样品没有流经毛细管的检测端,或者选择波长不太合适。缓冲液一般来说是改善分离的效果,不过有时可能也会由于pH的不同,改变样品所带电荷的正负。

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  • i_am_ling

    第10楼2010/09/04

    清洗一下管子,主要还是看一下缓冲溶液的pH值

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