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【邀您来解析】之色谱柱参数
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〓猪哥哥〓
第2楼2010/09/08
名词解释
柱体积:严格说来柱体积确实是需要减掉填料体积的。填料堆积密度约为0.6g/ml,所以柱体积计算的近似公式为:3.14*R*R*L-3.14*R*R*L*0.6/d 其中d是无孔二氧化硅的密度,大约为2.32g/ml。(引用)
外水体积:色谱柱内凝胶颗粒间隙,这部分体积称外水体积,亦称间隙体积,常用Vo表示。
内水体积:因为凝胶为三维网状结构,颗粒内部仍有空间,液体可进入颗粒内部,这就分间隙的总和为内水体积,又称定相体积,常用Vi表示。 不包括固体支持物的体积(Vg)。
峰洗脱体积:是指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液的体积,常用Ve 表示。当使用样品的体积很少时,(与洗脱体积比较可以忽略不计),在洗脱图中,从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时,洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。当样品很大时,洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点 (或半高处)。
〓猪哥哥〓
第3楼2010/09/08
色谱柱柱效测定采用什么溶剂,什么方法?测定柱效选用的样品是什么,柱效合格的标准是?一般多长时间会测定一次柱效?
色谱柱柱效主要通过两种途径测定。一是色谱柱生产商提供的测试样品,按照他们提供的报告给予测定,并记录和保存相关数据。二是通过测定苯环类物质,如苯,甲苯,联苯,萘以及混合液等。其中有些是有国家标准品买的。测定甲酸的时候因为ph原因,条件需要再改善。条件一般是流动相:甲醇:水(85:15),流量0.8ml/min,紫外光度检测器:波长254nm,进样量 5μl-10μl
柱效一个评判标准是达到色谱报告上数据。
色谱柱峰型同一样品下变差,或压力上升时,需要测定柱效。
晨曦
第5楼2010/09/09
在洗脱图中,从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。这个体积还含有柱后管路的体积吧?不同的管路,相同的色谱柱的Ve应该不一样的。
yijianfeixian
第9楼2010/09/10
Eclipse Plus C18(4.6*250mm,5um),这些字母和数字代表的是什么意义呢?
Eclipse Plus 应该是代表安捷伦旗下的一个系列,就像WATERS有Xterry,symmetry等不同系列一样,安捷伦也有Extend,HC,等系列
C18是代表柱子内部与硅羟基键合的碳分子上碳原子的数目,
250mm是长度,同样的柱子,长度越长,理论塔板数越多,分离的时间越长,
4.6是柱内径,内径越小,分离效果越小,当然柱压也会升高,
5um是内部填充颗粒的直径,同样也与分离度有关,颗粒细,同样的体积,填料就多,那么吸附交换的次数就增多当然柱压也比较高