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【第三届原创参赛】色谱仪器及附件维护心得

wangjinxiang825

2010/09/19

液相色谱（LC）

维权声明：本文为wangjinxiang825原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

色谱柱及其附件维护心得

对于每一个质量控制实验室而言，分析方法和分析设备及人员均是影响其高效、规范的主要因素。随着对分析质量（及时性与准确性）要求的日益提高。分析成本也随之有所提高，更精密的设备和耗材也越来越多的投入实际应用之中。耗材中色谱柱的地位和重要性也日益凸显。一般C18柱，氨基酸和手性化合物分析用的手性柱也成为我们分析工作者常用的分离工具。

关于色谱柱的使用在众多的文献和资料中已经提即，并有专论论述。在此，我们仅对自己使用中的一些心得与同仁们一起分享，希望给大家的工作能有一些帮助。

实验室最常用的C18长柱（250*4.6mm,5um），在使用完后，特别是流动相中有缓冲盐的，我们建议先使用10：90的甲醇水进行相应管路的冲洗，当然，如使用与流动相相应比例的甲醇与水冲洗系统管路效果会更佳（因乙腈较甲醇昂贵，且毒性较甲醇大，故常用甲醇代替乙腈）。一般采用10：90的甲醇水冲洗系统40分钟即可，大概10个柱体积。再使用甲醇：水=90：10冲洗30分钟，而后在使用甲醇：水=50；50冲洗30分钟即可。如果仪器许可，可以使用编好的方法运行直至仪器自动停泵。在初始进行同一样品分析的时候，我们也使用先用100%水冲洗，后用100%甲醇冲洗，但色谱柱的柱效下降很快，这与C18长链的疏水性有关。较长时间使用纯水冲洗，长链易断裂弯曲，键合点易脱落，从而失去或降低分离效能。另外，因流动相情况复杂，对于50：50甲醇水短暂保存的色谱柱来说，更易于与流动相融合，而不会导致析出缓冲盐的现象，也降低的单位分析样品的时间。我们深得其益，采用初始传统的冲洗方法，色谱柱在1年内消耗大约为采用新方法后的2倍，采用新方法后，色谱柱1年以来几乎未再添置，故障率也明显降低。几乎不需要维护。另外，手性正相柱的冲洗和维护也至关重要，主要有三点需要把握。系统转换时溶剂的相容性，溶剂极性不要跨越太大，柱子再生冲洗流速最好在0.5～0.8ml/min之间。色谱柱建议保存在流动相中或按照说明书规定保存。当然，柱子的两端堵头需要及时堵上。

色谱柱的修复不少资料也有介绍，我们在此谈谈我们的做法。如柱子采用文献所报道的再生方法（溶剂冲洗，反向冲洗）仍不能恢复其原来的柱效时，在洁净的桌面上，平铺洁净的纸，将接近报废的色谱柱的进样口端螺丝拆下，用洁净的耳勺或小称样勺挖下明显污染的填料，从报废的同型号填料色谱柱上取下未被明显污染的填料，填补上去，使用甲醇：异丙醇：正己烷一定比例，（其中甲醇及异丙醇比例应超过90%）缓慢轻轻滴加于新补的柱头上，用洁净的称样勺柄压紧，并压成其初始形状（平头或球冠状）。垂直方向拧紧螺帽，并在修复端滴加上述混合溶剂一两滴即可。后采用低流速（0.3～0.5ml/min）进行色谱柱冲洗。一般可以大部分恢复其性能。

关于保护柱的“ferrules-套圈”的更换，相关说明书上也有大概描述。“套圈”即保护柱尖头端上小的套圈。当连接时拧过或长时间使用“ferrules”会老化，因此当保护柱与色谱柱连接出现明显变形或漏夜时，需要更换套圈。具体做法为将已经无法使用的套圈使用agilent气相割刀将其割拉下，换上新的套圈,使用色谱柱开口的一端将其拧紧定型，即可。另外，在进行保护柱与色谱柱连接时切勿拧过，拧过会导致套圈会陷在柱端，此时，很难将套圈取下，导致该色谱柱报废。因此，按照标准的做法，拧保护柱或液相其他螺丝时，采用手拧或按照规定必须的扳手拧，一般1/4圈完全可以了，太过，很容易导致下次拧得更紧而致金属锥箍或PEEK螺纹损坏，最终漏夜。

色谱柱及其附属耗材的维护、使用技巧很多，我们也只是管中窥豹，只偶得其冰山一角。这其中需要的是不断的总结和思考。希望我们共同努力，去探索去掌握更深的使用技能和发掘设备和人员更深的潜能；学以致用，更加节约高效的做好我们的分析工作，更加多快好省的建设好我们的共同的家园。

王金祥

2010-09-19

精
该帖子已被管理者-有水有渝设置为精华，下面是奖励记录：加15积分,加5声望

分
该帖子已被版主-老多_小多加15积分，加2经验;加分理由:原创大赛奖励

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coffee8

第2楼2010/09/20

你太好了！
难得的原创作品呀！
只是本版真的无福消受呀
楼主写的是液相方面的问题！
虽然舍不得，也不能耽误了此贴前景呀！
我就忍痛割爱，把楼主的帖子转到也向版面了！
预祝此贴获得大奖！！
一个静静(tianyouyingying) 发表:帮你转到这来了

0

windy1987

第3楼2010/09/20

50：50甲醇水
如果利用仪器来混合不是太好吧，有些仪器会产生大量气泡，同时压力会加大！

0

有水有渝

第5楼2010/09/20

应助达人

１、建议先使用10：90的甲醇水进行相应管路的冲洗，当然，如使用与流动相相应比例的甲醇与水冲洗系统管路效果会更佳。
请问，为什么呢，如果我用的是缓冲盐-甲醇（10:90)的流动相，那么最好是用90%的甲醇清洗？
２、使用甲醇：水=90：10冲洗30分钟，而后在使用甲醇：水=50；50冲洗30分钟即可。
请问，有没有可能出现甲醇：水=90：10清洗不干净的情况，你觉得有没有必要用100%甲醇清洗一下？长期保存色谱柱是应保存在什么试剂里？

0

marchingon

第6楼2010/09/21

C-18柱用纯水冲洗不好啊？

0

菜头

第10楼2010/09/21

我的经验是无论是否流动相是缓冲溶液，最好还是先用5％－20%的甲醇先冲洗10倍柱体积或冲洗半小时，然后再用80％的甲醇水冲洗，最后还是用100％的甲醇冲洗保存。
低浓度的水溶液是为了冲洗柱子里面的盐分，80％的甲醇是能冲洗出大多数的杂质，个人感觉比用100％的甲醇更容易冲出，再用100％的甲醇洗出强保留的物质并平衡保存。

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windy1987

第11楼2010/09/21

我的操作一般也是这样~
laohutushen(laohutushen) 发表:我的经验是无论是否流动相是缓冲溶液，最好还是先用5％－20%的甲醇先冲洗10倍柱体积或冲洗半小时，然后再用80％的甲醇水冲洗，最后还是用100％的甲醇冲洗保存。
低浓度的水溶液是为了冲洗柱子里面的盐分，80％的甲醇是能冲洗出大多数的杂质，个人感觉比用100％的甲醇更容易冲出，再用100％的甲醇洗出强保留的物质并平衡保存。

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21kgtan

第12楼2010/09/22

我很少用到甲醇，一般先5%乙腈冲洗半小时，再95%乙腈冲洗半小时然后保存

0

liuliuhui

第14楼2010/09/22

为什么最后要用而后在使用甲醇：水=50；50冲洗30分钟呢，我们一般冲柱都是最后用甲醇啊？

0

青林

第16楼2010/09/23

是啊，现在人都很懒，弄个清洗程序，编好了就回去睡了

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可爱宝贝

第17楼2010/09/23

色谱柱的冲洗方法应该和流动相有一定的关系，如我有一流动相是磷酸盐和纯水配制，只要沾上有机溶液立刻管道里就堵，只能是在分析完样品后用纯水冲洗4个小时后，才能用20%的甲醇水溶液过度

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