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【第三届原创参赛】老生常谈——开放ODS柱色谱在分离纯化中的应用

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2010/09/20

维权声明：本文为环烯醚萜原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

老生常谈——开放ODS柱色谱在分离纯化中的应用

什么是ODS？
ODS是英文octadecyl silane的缩写，意思是十八烷基硅烷，是以硅胶为基质键合的C18填料，属于反相色谱。ODS柱色谱，简单地说，就是指用ODS装成的色谱柱啦。“开放”一词，是指未对色谱柱施加任何压力，让其在重力作用下洗脱；相对于开放ODS柱色谱，有中低压柱色谱，高低柱色谱等等。
我们平时所说的反相HPLC，一定程度上来说，其实也可以说是ODS柱色谱，只不过它的分离效果更好，还配备了紫外或者示差等高级地检测手段，其实质还是属于反相柱色谱。

适用范围有哪些？
首先需要说明：ODS在分离纯化的过程中，起着极为巨大的作用！！
就化合物极性而言，ODS适合分离极性中等偏大的化合物类型。对于极性较小的化合物，应该考虑用硅胶、凝胶等手段进行分离纯化，绝对不要尝试ODS，唯一的后果只能是：样品全部死吸附，根本不可能洗脱！！
某些行业，前处理一般是萃取，比如环己烷/石油醚、乙酸乙酯/氯仿、正丁醇、水。水层的、正丁醇层的样品，一般都可以用ODS进行分离纯化；乙酸乙酯层的样品，极性偏大的部分可以考虑用ODS；至于环己烷层的样品，千万不要使用ODS，那将是：上样量多少，死吸附就有多少！！
就化合物分类而言，ODS对于黄酮苷类、环烯醚萜苷类、糖苷类等成分都能有一定的分离效果，也有很多成功的分离纯化实例。但是，对于苷元类化合物，则需要慎重考虑，其实还是极性大小的问题：苷元类化合物，一般极性较小。

如何装柱、上样、洗脱？
装柱：新买来的ODS，用甲醇浸泡过夜后即可装柱。具体的装柱方法，跟硅胶的装柱子法是一样的，记得用甲醇装柱就行。装完以后，置换成起始流动相系统，即可投入使用了。
上样：分为两种，一种是湿法上样，另一种是拌样。湿法上样，不必多说，就是将样品溶解至一定体积（强烈建议用起始流动相溶解，但体积不可过大，太大相当于原点变大，分离度变差），然后上样；至于拌样，很多的观点表示ODS不应该拌样，我在这里指出，依我个人经验来看，拌样是可以的，尤其对于一些溶解性较差的样品，拌样后分离的效果，比湿法上样好很多，大家可以尝试。（所谓拌样，就是指将你的样品溶解，然后从柱子里面掏出小部分ODS，然后进行拌匀，注意不要过载）
洗脱过程：如果你有ODS薄层板，你可以先点板看看样品大概的极性大小。如果你没有ODS板，你拿到的是“盲样”，一般可以采取常规的梯度洗脱，如水——30%甲醇/水——50%甲醇/水——70%甲醇/水——100%甲醇，然后依据各流分样品量的大小进一步进行细分；经过常规的梯度洗脱以后，假设，你的样品集中在50%的甲醇/水部分，进行细分的时候，你就可以选择40%甲醇/水——45%甲醇/水——50%甲醇/水——100%甲醇这样的梯度。
流动相的选择：其实就是反相流动相，无非就是甲醇/水，乙腈/水，流动相中也可以加入一些其他物质。我曾经很多次加入乙酸，用来改善拖尾的现象（点ODS薄层板分析过）。至于缓冲盐，我没有试过，具体情况不太了解。

洗脱样品的如何处理？
洗脱下来的样品，可用硅胶薄层板进行点板分析，然后将相同流分进行合并，也可以采用HPLC检测合并。
我认为，对于一些量小的流分，相差不是很大的，尽量合并，避免样品的分散；
对于一些量大的流分，可合可不合，反正量大，合与不合的效果是一样的（无非就是多占点空间）；
从ODS上洗脱的流分，很可能是纯品；易结晶的样品，会在溶剂挥发的过程中结晶析出来，要注意观察；

柱子被污染如何处理？
污染是正常的，见过那么多，也用过那么多ODS柱子，没有哪一根能在使用一段时间后保持“洁白无瑕”的。
被污染，一般情况下就是用甲醇冲洗，一直到冲洗液蒸干没有杂质为止，就可以进行下一批样品的分离了。
也许有人问：你这么处理彻底吗？回答是否定的，但是，对于ODS柱色谱，这样的处理已经足够了。
道理很简单，用ODS进行分离的样品，一般极性不会很小，70%甲醇/水基本能全部冲洗下来。现在已经用甲醇冲洗得差不多，在你对下一批样品进行分离的时候，上一批残留的杂质也就只有100%的甲醇能洗脱下来，根本不会影响。
如果一定要处理，可以采用甲醇：异丙醇＝1：1冲洗，这种做法，算是终极做法了。

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liuliuhui

第1楼2010/09/20

不错，总结得很详细，楼主的原创还真不少，我也要抓紧了
写个凝胶之类的

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berberinecell

第2楼2010/09/20

ODS我们也常用，学习了,谢谢楼主分享！

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第3楼2010/09/21

终于写完了，呵呵~
大家有什么问题可以提啊，我好补充啊~

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风肃

第4楼2010/09/22

学习了！

现在工作中都使用ODS色谱柱了！

才疏学浅，有些东西向楼主请教哈：我是做检测的，日常工作中都是用柱子去除些杂质，用的都是硅酸镁柱或者硅藻土柱，都是简单的纯化！不知楼主用ODS这种柱子是用在哪些领域呀？后续样品如何处理？

据我所知，过柱都是有机合成上的传统常用的合成产物的提纯分离方法。不知道出于什么样的原因不用制备型液相色谱呢？

谢谢楼主哈，中秋愉快！

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第5楼2010/09/22

回楼上的~

ODS可以应用在很多领域啊，涉及到分离纯化方面的都可以~

制备液相也是用的，ODS只是前处理的一个手段而已~
前处理好的，合适的样品，也可能成为最终处理的~
一般是上完ODS，然后利用HPLC对于一些难于分离的样品进行纯化~

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阿喜

第6楼2010/09/23

哈哈，楼主真是对ODS见解颇深

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第7楼2010/09/23

你的大孔呢？
半天没反应啊~
答应很久了吧？
qweaxi(qweaxi) 发表:哈哈，楼主真是对ODS见解颇深

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frappuccino

第9楼2010/09/27

楼主我也来捧个场
。帮助补充一个我喜欢的终极洗柱子的方法，使用氯仿和甲醇（3：7）冲洗，效果相当牛。

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第10楼2010/09/27

不敢轻易尝试啊~
对填料没有副作用？
frappuccino(frappuccino) 发表:楼主我也来捧个场
。帮助补充一个我喜欢的终极洗柱子的方法，使用氯仿和甲醇（3：7）冲洗，效果相当牛。

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frappuccino

第11楼2010/09/27

和树脂的品牌也有关系，先可以小试一下。
你不放心可以，取一点树脂自己先试验一下。
如果都化了，就别用了。
我用的AB8 没问题。

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