本方法参考GBT 22509-2008国标方法：动植物油脂 苯并（a）芘的测定 反相高效液相色谱法。如有任何产品或技术咨询问题，请拨打客服热线400-600-8099
相关技术差异为：
①对仪器设备作了改动；
②氧化铝层析柱采用商品化Cleanert BaP固相萃取柱；
③将洗脱溶剂改为采用色谱纯的正己烷；
④待测液定容体积改为300μL，采用仪器自动进样，进样量为20μL；
⑤采用外标法定量计算。
一、实验原理
用正己烷溶解油脂样品，上样到CleanertBaP固相萃取柱，去除脂肪酸等，再用正己烷洗脱苯并（a）芘，采用反相高效液相色谱法分离，荧光检测器检测。
二、试剂与材料
2.1CleanertBaP固相萃取柱，22g/60mL（P/N: BaP2260）：100-200目，brockmann活度Ⅳ级，在室温下避光保存，天津博纳艾杰尔科技有限公司；
Venusil ASB-C18，250mm×4.6mm×5.0μm（P/N：VS952505-0）
2.2色谱纯正己烷；
2.3 苯并（a）芘标准储备液：称取10mg标准品于10mL容量瓶中，用正己烷定容，配制的标准储备液浓度为1000mg/L；
3.4 标准工作液：用正己烷稀释标准储备液，稀释的浓度为10μg/L。
三、仪器和设备
3.1 旋转蒸发仪，大于150mL的鸡心瓶或圆底旋蒸瓶；
3.2 氮吹仪；
3.3 涡旋混合器；
3.4 2ml进样瓶；
3.5 250μL进样瓶玻璃内插管；
3.6 高效液相色谱仪，配自动进样器，荧光检测器。
四、样品前处理
4.1称取约0.300g的油样，用5mL正己烷溶解涡旋混合器上充分混匀。
4.2活化：用约30mL正己烷将氧化铝柱预先活化，活化过程直到氧化铝柱末端正己烷自然滴下约5mL为止。
在正己烷滴出的过程中，柱体上部要不断添加正己烷，千万注意不能让正己烷低于柱子的上筛板，避免空气进入柱子！将滴出的约5mL正己烷去除，不予收集。
4.3上样：将溶解好的油样添加到预活化好的氧化铝柱子中，注意操作过程中上筛板不能干涸。
4.4洗脱：添加80mL正己烷，用150mL的旋蒸瓶接收，直到80mL的正己烷完全自然滴出。如果苯并芘回收率不高，可以增加正己烷的洗脱体积，最多可至120mL。
操作过程中不需要加压或抽真空加快流速，让正己烷在重力作用下自然洗脱。
4.5将洗脱液在45℃水浴中旋转蒸发至干，如果仍然有油滴无法蒸干，说明净化不完全，需要向油滴中添加80mL的正己烷制得新样，取一根新柱重复上述净化过程；
4.6用总计10mL的正己烷分三次淋洗旋蒸瓶，合并淋洗液到氮吹管中，氮气吹干。添加300μL的正己烷到氮吹管中，在涡旋混合器上充分混匀。注意氮吹过程避免气流过大，造成液体溅出；涡旋过程避免正己烷蒸发。
4.7将上述300μL的正己烷转移至2mL进样瓶内插管中，进样分析。
五、色谱条件
色谱柱：Venusil ASB-C18，250mm×4.6mm，5.0μm；
流动相:乙腈：水 =88：12；
流速：1.0mL/min；
进样量：20μL；
荧光检测器：发射波长406nm，激发波长384nm。
六、实验结果和讨论：
6.1结果：
本方法的采用Cleanert BaP固相萃取柱用于某植物油苯并（a）芘的净化处理于5ug/kg添加水平可获得99.49%回收率，采用Venusil ASB-C18所得到的图谱见图1～3。
图1、 5μg/L苯并（a）芘的标准样品的色谱图
图2、某植物油的实际样品色谱图
图3、某植物油加标量为5μg/Kg的标准样品色谱图
表1、苯并芘的回收率
| 5μg/L标准品 | 油脂实际样品 | 油脂加标样品 | 回收率 |
苯并（a）芘 响应值 | 242.225 | 238.02 | 479.001 | 99.49% |
6.2讨论：
6.2.1本方法采用商品化的Cleanert BaP固相萃取柱，避免了原国标方法中人工处理填料和装填的繁琐过程，可大大节省工作时间，提高工作效率；同时商品化的Cleanert BaP固相萃取柱避免了原方法中人为装填过程的误差和由此可能导致的结果不稳定性，因此具有更佳的回收率和重现性；Cleanert BaP固相萃取柱配合Venusil ASB-C18色谱柱优异的表现，可满足动植物油脂 苯并（a）芘的检测的需求，保证结果的准确性和稳定性，同时大大提高工作效率！
6.2.2由于实验者没有专用PAH的色谱柱，本方法采用了Venusil ASB C18柱来分析，该柱基本能满足分析要求。但是若采用Venusil PAH专用柱，分离效果会更好。将Venusil PAH分析的谱图补充如下。
图3、某植物油加标量为5μg/Kg的标准样品色谱图
6.2.3 油脂的取样量不宜超过0.3g，否则容易造成净化不完全的现象。
6.2.4 最后定容体积为300μL，避免了国标里的定容体积（100μL）过小，
不便于操作的问题。
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