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【求助】奇怪的柱压高,如何处理?-Agilent红色警报解除后

  • hailingfei2006
    2010/10/10
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 色谱柱:ODSC18柱(250 mm×4.6mm,5μm)
    Agilent 1200配置: 在线脱气-G1322A
    四元泵-G1311A
    自动进样器-G1316A
    TCC-G1316A
    DADG1315D

    前提:
    1之前为了建立方法,摸索液相个组分比例,调节乙腈、甲醇、20mm的磷酸二氢钾的各比例,用了一天,正常操作,没问题。
    2后来换做20mm的磷酸二氢钾为pH=3.66醋酸水溶液,因为红色警报问题,柱子在乙腈和甲醇,以及pH3.66的环境下,静置了2天。 3前天修好设备,正常的水-甲醇水-甲醇,冲柱子。
    4昨天下午开始使用液相,进样DMSO含药母液10ul两针,调节乙腈、甲醇、20mm的磷酸二氢钾的各比例共计2次,操作没问题,下午6点左右发现柱压很低,经检查发现漏液,后拧紧柱子前端的peek(对?)漏液停止,但是压力不稳,跳动很大,后经purge阀除气饱而解决。紧接着,就发现,在50:50的甲醇水当中,柱压很大,立即调节比例为甲醇水10:90,流速0.3,冲了一个晚上,至目前,柱压很高。

    问题:
    柱压高。表现为,水:甲醇=90:10,柱温40℃,流速1.0ml/min,柱压为152bar。

    措施:
    分析可能是之前用磷酸盐缓冲液造成晶体析出,所以用水:甲醇=90:10,流速为0.3ml/min冲了一个晚上,今早上来,升至流速为1.0,柱压仍未152,后来提高柱温为40℃,希望增加磷酸盐溶解,冲柱3小时,柱压稳定为146。考虑到柱压变化不大,认为可能有其他杂志,故提高甲醇比例,但是柱压立马就上来,试着纯甲醇,柱压飙升至170还在往上涨,本人立刻将流速将为零,调节至低甲醇比例。

    疑问:
    1是柱前压力大,还是柱后压力大?怎么操作?
    2看论坛上说可以用异丙醇冲,为什么?怎么个比例和操作要求?(流速、柱温,适用条件?)
    3要把柱子扯下来,超声么?用纯甲醇超声?柱子上那些配件可以去掉?--仅是方法建立,没进血样,所以没装预柱。
    4反冲,什么情况下反冲,会不会很折寿柱子? -据说很费柱子,基本上学生不想考虑此方法。
    5柱压降到什么水平算是正常水平?(甲醇水=10:90),什么范围内我可以进行自己的实验?
    6经过讨教,有人建议我调节在柱压为100bar的情况下,按照这个压力下的流速冲柱子一段时间,为什么是这个柱压?
    7最好最坏的结果是什么?根据大家的经验,我最久要冲多久?柱压最佳水平预计能恢复到多少?

    补充:
    1我用的双蒸水是millipore机器产的,没有过滤直接用了,后来配制磷酸盐缓冲液时,发现过滤的时候会有小毛毛,就像是那种及其小的纤维,我在想millipore的双蒸水会不会不过滤也有呢?不知道目前造成柱压高的原因到底是因为磷酸盐还是其他杂质。有过一个步骤,换做甲醇想冲掉溶于有机溶剂的杂志,柱压更是飙升,就没敢冲。

    大家说我该怎么办呢?边学边做实验,没想到也液相学问那么大,没想到液相和我这么纠结。
    谢谢大家!

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  • fengmo4668

    第1楼2010/10/10

    估计是过滤器堵了,卸下来超声吧

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  • 有水有渝

    第2楼2010/10/10

    应助达人

    1、是柱前压力大,还是柱后压力大?怎么操作?
    拆去色谱柱就知道是柱前大还是柱后大
    2、看论坛上说可以用异丙醇冲,为什么?怎么个比例和操作要求?
    用异丙醇的主要作用是它比甲醇的极性弱,可以把一些极性弱的,在纯甲醇下洗脱不完全的物质洗脱下来,在柱子中盐没有冲洗干净前,不可使用纯异丙醇。
    3、要把柱子扯下来,超声么?用纯甲醇超声?柱子上那些配件可以去掉?
    柱子不能超声,但筛板可以,不过很少有人这么做。建议不管样品基质是否复杂,都加保护柱。
    4、反冲,什么情况下反冲,会不会很折寿柱子?
    首先是在其它清洗方法都无法解决时使用反冲,还在确定反冲不会把填料冲出来。
    5、柱压降到什么水平算是正常水平?
    250*4.6mm,5um的色谱柱,1.0流速,一般在纯甲醇下5-6MPa.
    6、这个方法没有研究
    7、最好最坏的结果是什么?
    最好的结果是修复,最坏当然是报废了,修复时间这个难定,我觉得你还是再找找原因。

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  • dzh2188

    第3楼2010/10/10

    二通代替柱子看看,压力变化多大;分段“感觉”压力增大在哪个地方,采取对应措施。主动阀、单向阀、溶剂过滤头等该超声的超声。还是慢慢增加甲醇比例,低流速洗洗看。

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  • 〓猪哥哥〓

    第4楼2010/10/12

    楼主的问题有没有得到解决?反馈一下

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  • baohulu618

    第5楼2010/10/14

    1 打开PURGE阀,流速5ml,看看压力是否低于10bar,高于10就换滤芯。
    2 不接柱子流速1ml看看压力是否小于15bar,高于就检查是否管线有堵。
    3 只有刚开瓶的娃哈哈可以用,millipore如果不经常维护,它产生的水也是不能用的。

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  • huijian8341

    第6楼2010/10/17

    有可能是柱前堵塞,流动相中的杂质在柱头积累

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