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踏破铁鞋无觅处，得来全不费工夫---记一次SephadexLH-20在分离中的应用
姜黄化学成分
中药姜黄为姜科姜黄属(Curcuma)多年生草本植物姜黄Curcuma longa L.的干燥根茎，味苦、辛、性温，归脾、肝经，具有破血行气、通经止痛之功效，主治寒凝气滞血瘀等症。化学成分主要含有二苯庚烷类，如curcumin（R1=R2=OMe）、demethoxycurcumin（R1=H，R2=OMe）、bisdemethoxycurcumin（R1=R2=H）；挥发油（类型主要为没药烷型、愈创木烷型以及吉马烷型，与姜黄属其他植物相比姜黄中的没药烷型倍半萜含量高）；Calebin类，如2002年Park等首次从姜黄中分离得到的calebin-A。
姜黄药理作用
1、抗肿瘤作用
姜黄素及其衍生物能抑制实验动物皮肤癌、胃癌、十二指肠癌、大肠癌、结肠癌及乳腺癌等的发生，显著减少肿瘤数目，缩小瘤体大小，降低小鼠黑色素瘤细胞的肺转移及淋巴细胞生长。可使人结肠癌细胞、人肾癌细胞及人肝癌细胞等出现皱缩、染色体凝集及DNA碎裂，并选择性抑制急性髓性白血病细胞HL-60，且作用强度与给药浓度及作用时间成依赖关系。
2、抗炎作用
姜黄素及姜黄挥发油对急性和亚慢性炎症模型有效。
3、肝保护作用
姜黄素和姜黄在体内和体外对各种毒物有肝保护作用，如对四氯化碳、黄曲霉毒素B-1、对乙酰胺基酚、铁和环磷酰胺诱导的小鼠、大鼠和小鸭的肝损伤都有保护作用。
4、抗氧化作用
姜黄素类为抗氧化有效成分，能清除氧自由基而发挥抗氧化活性。
5、抗老年痴呆作用
姜黄素可以阻止beta淀粉样蛋白堆积在大脑中，从而能有效预防老年痴呆症。Calebin A及姜黄素可以保护正常细胞不受beta淀粉样蛋白损伤。
6、抗HIV作用
姜黄素具有抗病毒活性，其作为HIV-1整合酶抑制剂的IC50值为40μM，同时证明了姜黄素及其衍生物可发展为抗艾滋病药物。
7、其它作用
此外，姜黄还具有降脂、抗诱变、治疗创伤、降低由于吸烟和饮酒带来的过脂质体紊乱 、防止大鼠白内障 、抗过敏以及抗组胺等作用。
姜黄作为传统中药具有多种功效，同时作为食品添加剂，其不仅具有着色的作用，而且兼顾医疗及保健的功能，在国际市场上享有很高声誉，是联合国粮食与农业组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）所规定的使用安全性很高的天然色素之一。其主要成分姜黄素及其衍生物是一类多效的天然活性物质，具有较强的抗肿瘤活性，其作用机制复杂多样，而且毒性小，价格低廉，药源充足，很有开发前景。
基于以上几点，我的工作就则样开展了。首先我们用80%的甲醇对姜黄药材进行了提取，将浓缩后的提取物浸膏，以硅胶拌样进行硅胶柱色谱分离。经硅胶柱色谱后的各馏分又采取了不同的针对性分离，比如开放ODS柱色谱，凝胶柱色谱，薄层制备色谱，高效液相制备等手段。
实验部分
我将要介绍的这一馏分是硅胶柱色谱的第十个流分。之后将其进行了开放ODS柱色谱的分离（因为我想用液相制备分离）。得到一馏分液相分析情况如下：
很杂对吧，但主要峰有一个，于是我就进行了高效液相制备。制备后进行了分析，图谱如下：
可以看到比以前好多了，但仍然不够纯，于是发狠将条件稍微变动又进行了一次高效液相制备，这次应该纯了吧，结果一分析，让人心里凉了半截，还是没有纯化。这次分析情况如下：
痛定思痛，我觉得做实验不要头脑发热，经过整理我发现，杂质吸收与我要分离的目标成分不一样差别很大，所以我认为杂质与目标成分极性很相似不管在正相还是反相硅胶上，但其不是一类化合物，其分子类型应该不同，所以是否可以考虑以分子量差别为分离手段的SephadexLH-20柱色谱。于是我将样品进行了凝胶柱色谱的分离。效果是让人吃惊的兴奋，在凝胶柱上，样品很明显的分为两个色带。其中第二个色带就是我要的成分，由于当时没有拍照，色带大家是看不到了。但液相分析图谱可以说的很清楚。大家请看：
有了前面的例子几天后，我又有了一个自认为挺成功的例子，经斑竹建议现在也加进来。样品在经凝胶柱前的分析图谱如下：
经凝胶柱分离后某一馏分的分析情况如下：
小结与讨论
下面谈一下本人分离纯化的感受吧，首先拿到一个植物总提物，一般量都很大，要考虑的粗砍断手段有限，一般为大孔树脂或硅胶，那就需要分析小试了，硅胶本人以为薄层分析一下足以，首先看一看死吸附是否严重，就是看用甲醇展开是不是大部分成分都能展上去，如果死吸附不严重，可选择合适溶剂进行摸条件，如果溶剂配比不同，展开情况差别明显说明硅胶分离手段可选，至于大孔，需取少许样品小试，然后看分离情况而定。如果含酚羟基之类可以考虑聚酰胺柱色谱，除色素需用凝胶柱色谱，然后还有开放ODS柱色谱，在做液相之前，本人推荐先用开放ODS柱色谱进行分离，一来利于液相条件选择，二来对色谱柱是一种保护。最后做分离纯化最好各种分离手段都用一般，使复杂的成分可以根据不同的分离原理分开。哈哈，写的不好，大家不要头疼哦。
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