青林
第1楼2010/11/06
五、更换流动相并排气泡
1.将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中;
2.逆时针转动A/B泵的排液阀180°,打开排液阀;
3.按A/B泵的[purge]键,pump指示灯亮,泵大约以9.9ml/min的流速冲洗,3min(可设定)后自动停止;
4.将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。
5.如管路中仍有气泡,则重复以上操作直至气泡排尽。
6.如按以上方法不能排尽气泡,从柱入口处拆下连接管,放入废液瓶中,设流速为5ml/min,按[pump]键,冲洗3min后再按[pump]键停泵,重新接上柱并将流速重设为规定值。
六、平衡系统
1、查看基线:
1.1 按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件,
1.2 输入实验信息并设定各项方法参数后,
1.3 按下“数据收集”页的 [ ] 按钮。
2 、等度洗脱方式
2.1 按A泵的[pump]键,A、B泵将同时启动,pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统,一般最少需6倍柱体积的流动相。
2.2 检查各管路连接处是否漏液,如漏液应予以排除。
2.3 观察泵控制屏幕上的压力值,压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡,按检查管路后再操作。
2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min,噪声为<0.001mV时,可认为系统已达到平衡状态,可以进样。
3 、梯度洗脱方式
3.1 以检验方法规定的梯度初始条件,按2项下方法平衡系统。
3.2 在进样前运行1~2次空白梯度。方法:按A泵的[run]键,prog.run指示灯亮,梯度程序运行;程序停止时,prog.run指示灯灭。
七、进样
1 、进样前按检测器[zero]键调零,按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点,再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。
2 、用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量即可以进样了。
3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次 。
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第2楼2010/11/06
八、谱图的判断及结果计算
1、内标法 用含对照品和内标物质的对照溶液所得色谱峰响应值,按下式算出校正因子(f):其中 As和Ar分别为内标物质和对照品的峰面积或峰高,ms和mr分别为加入内标物质和对照品的量。
2、外标法:
①用含对照品的对照溶液所得色谱峰响应值,按下式计算比值(r):r=mr/Ar(其中 mr和Ar分别为对照品的量和相应的峰面积或峰高。 )
②再根据供试品溶液的色谱峰响应值,计算供试品中被测成分的含量(mi):mi=r×Ai(其中 Ai为供试品溶液中被测成分的峰面积或峰高)。
③必要时,再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成标示量的百分含量,或根据稀释倍数、取样量折算成百分含量。
九、清洗管路及进样口
1、分析完毕后,先关检测器和数据处理机,再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统,正相柱一般用正已烷,反相柱如使用过含盐流动相,则先用水,然后用甲醇-水冲洗,冲洗前先按(4.1.1~4.1.2)操作,再用分析流速冲洗,各种冲洗剂一般冲洗15~30分钟,特殊情况应延长冲洗时间。
2、冲洗完毕后,逐步降低流速至0,关泵,进样器也应用相应溶剂冲洗,可使用进样阀所附专用冲洗接头。
3 、关断电源,作好使用登记,内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压,使用小时数,仪器完好状态等。
【特殊情况】:谱流路系统,从泵、进样器、色谱柱、到检测器通池,在分析完毕后,均应按(5.1)充分冲洗,特别是用过含盐流动相的,更应注意先用水,再用甲醇-水,充分冲洗。