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【求助】请教:样品的峰面积检测出现问题了?

  • feixiang3152
    2010/12/01
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 求助,面积归一法,拖尾因子大,峰面变异系数大。

    本人所做实验为一种大分子的病毒蛋白的纯度测定(面积归一法)。采用的分子排阻色谱柱,病毒蛋白浓度在10ug/ml左右,流动相为1mM PB,进样量50ul。 现在的问题是目的峰拖尾因子太大,2.3左右; 另外连续进针,样品的峰面积变异系数7%左右,不同天的变异系数更大。

    本人新手,恳求各位有经验的大虾多多指教讨论,有可能是什么原因以及有什么办法能解决。
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  • 有水有渝

    第1楼2010/12/01

    应助达人

    方法是自己建立的吗?进样量有没有使用满定量?

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  • feixiang3152

    第2楼2010/12/01

    方法为自己建立的新方法。 什么叫满定量? 是指超过柱载或检测限吗? 如果是的话那没有超的,因为体积也是我试过不同体积后确定下来的,有试过100ul,没有问题的。 自动进样器,刚做过检测,没问题。

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  • feixiang3152

    第3楼2010/12/04

    我样品浓度已经很低了 大约在10ug/ml左右 峰高才2.5mV 还需要再降低吗?

    流动相为1mM PB是,1mM PB是浓度为1m mol/L的 磷酸盐缓冲液
    仪器的系统适应性实验怎么做?

    请教大家!!

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  • 有水有渝

    第4楼2010/12/05

    应助达人

    把磷酸盐缓冲液的浓度提高到50m mol/L试试,仪器的系统适应性只要你的所要成分完全分离,分离度达到1.5以上,理论塔板数达到要求,一般3000-5000以上就行,系统适应性检测浓度一般选择较低浓度,你的峰高才2.5mV ,就用这个浓度就行了。

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