johne0212
第1楼2010/12/04
做绿原酸关键看你色谱条件,一般的色谱柱都可以把它所有的同分异构体分开的,给你一个条件您可以参考一下,关于UPLC的方法也有普通BEH C18就可以了。
1。HPLC mobile phase A
Into a 2000 mL screw-capped bottle pour 1840 mL of water (HPLC Grade) and 160 mL of acetonitrile (HPLC Grade). Add 2mL of orthophosphoric acid (Analytical Grade). This solution is stable for 1 month when stored at room temperature.
2。HPLC mobile phase B
Into a 1000 mL screw-capped bottle pour 500 mL of water (HPLC Grade) and 500 mL of acetonitrile. Add 2 mL of orthophosphoric acid (Analytical Grade). This solution is stable for 1 month stored at room temperature.
3。HPLC conditions
Start-up the HPLC system with the following conditions:
Column: Spherisorb C18 ODS-1
Injection volume: 20 µl
Column temperature: ambient, No column thermostat is needed provided that the temperature does not fluctuate more than 5°C within the run of the analytical sequence.
Flow rate: 1 mL/min using the following gradient
Mobile phase: as stipulated under § 6.2 and § 6.3 applying the following gradient (Table 1)
Table 1. HPLC Gradient conditions
Time (min) Mobile phase A (%) Mobile phase B (%)
0 98 2
15 88 12
25 50 50
30 30 70
35 30 70
37 98 2
45 98 2
Detection: 325 nm
wdl158160
第2楼2010/12/04
原来小贺啊,嘿嘿!
你说的太笼统了,帮你补充一下吧:
1.标准:2010版药典
2.条件:
柱子 YMC PACK ODS-A C18
流动相 甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(18:85:1:0.3)
柱温 35-40度
流速 0.8ml/min
仪器 Agilent1200
3.问题:
(1)主峰本就有点拖尾,主峰后有个杂质峰和其混在一起分不开,一般看不出来,加在一起就像是一个拖尾严重的峰,其实是两个成分,分不开!
(2)样品在120min左后有个大的杂质峰,我们采集时间设为15min,在大批量连续进样到8针左右,这个杂质峰就会出来,把基线抬的很高(15min的采集时间里有一半都受影响),控制不好就会和绿原酸峰重叠到一起,影响测定。
4.提问:
(1)有没有相关经验的人给推荐个更适合的柱子,使绿原酸峰不拖尾,而且能把那个杂质峰给分离出来。
(2)有没有好的方法解决那个120min出来杂质峰,前提是不冲柱子。
johne0212
第3楼2010/12/04
不用换柱子试一下上面的流动相和梯度条件就可以了,我做的时候进很多样品都没有干扰
〓猪哥哥〓
第4楼2010/12/05
1、采用梯度分
2、第8针冲洗柱子,如果长期停留在色谱柱,压力也会变化