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【求助】请问有专门的柱子做绿原酸吗?

  • zhanghe-2008
    2010/12/04
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 我用的是YMC PACK-ODS的柱子做绿原酸 进样7-8针之后有大包 请问有专门的好柱子吗?
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  • johne0212

    第1楼2010/12/04


    做绿原酸关键看你色谱条件,一般的色谱柱都可以把它所有的同分异构体分开的,给你一个条件您可以参考一下,关于UPLC的方法也有普通BEH C18就可以了。
    1。HPLC mobile phase A
    Into a 2000 mL screw-capped bottle pour 1840 mL of water (HPLC Grade) and 160 mL of acetonitrile (HPLC Grade). Add 2mL of orthophosphoric acid (Analytical Grade). This solution is stable for 1 month when stored at room temperature.
    2。HPLC mobile phase B
    Into a 1000 mL screw-capped bottle pour 500 mL of water (HPLC Grade) and 500 mL of acetonitrile. Add 2 mL of orthophosphoric acid (Analytical Grade). This solution is stable for 1 month stored at room temperature.
    3。HPLC conditions
    Start-up the HPLC system with the following conditions:
    Column: Spherisorb C18 ODS-1
    Injection volume: 20 µl
    Column temperature: ambient, No column thermostat is needed provided that the temperature does not fluctuate more than 5°C within the run of the analytical sequence.
    Flow rate: 1 mL/min using the following gradient
    Mobile phase: as stipulated under § 6.2 and § 6.3 applying the following gradient (Table 1)

    Table 1. HPLC Gradient conditions
    Time (min) Mobile phase A (%) Mobile phase B (%)
    0 98 2
    15 88 12
    25 50 50
    30 30 70
    35 30 70
    37 98 2
    45 98 2

    Detection: 325 nm

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  • wdl158160

    第2楼2010/12/04

    原来小贺啊,嘿嘿!
    你说的太笼统了,帮你补充一下吧:
    1.标准:2010版药典
    2.条件:
    柱子 YMC PACK ODS-A C18
    流动相 甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(18:85:1:0.3)
    柱温 35-40度
    流速 0.8ml/min
    仪器 Agilent1200
    3.问题:
    (1)主峰本就有点拖尾,主峰后有个杂质峰和其混在一起分不开,一般看不出来,加在一起就像是一个拖尾严重的峰,其实是两个成分,分不开!
    (2)样品在120min左后有个大的杂质峰,我们采集时间设为15min,在大批量连续进样到8针左右,这个杂质峰就会出来,把基线抬的很高(15min的采集时间里有一半都受影响),控制不好就会和绿原酸峰重叠到一起,影响测定。
    4.提问:
    (1)有没有相关经验的人给推荐个更适合的柱子,使绿原酸峰不拖尾,而且能把那个杂质峰给分离出来。
    (2)有没有好的方法解决那个120min出来杂质峰,前提是不冲柱子。

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  • johne0212

    第3楼2010/12/04

    不用换柱子试一下上面的流动相和梯度条件就可以了,我做的时候进很多样品都没有干扰

    wdl158160(wdl158160) 发表:原来小贺啊,嘿嘿!
    你说的太笼统了,帮你补充一下吧:
    1.标准:2010版药典
    2.条件:
    柱子 YMC PACK ODS-A C18
    流动相 甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(18:85:1:0.3)
    柱温 35-40度
    流速 0.8ml/min
    仪器 Agilent1200
    3.问题:
    (1)主峰本就有点拖尾,主峰后有个杂质峰和其混在一起分不开,一般看不出来,加在一起就像是一个拖尾严重的峰,其实是两个成分,分不开!
    (2)样品在120min左后有个大的杂质峰,我们采集时间设为15min,在大批量连续进样到8针左右,这个杂质峰就会出来,把基线抬的很高(15min的采集时间里有一半都受影响),控制不好就会和绿原酸峰重叠到一起,影响测定。
    4.提问:
    (1)有没有相关经验的人给推荐个更适合的柱子,使绿原酸峰不拖尾,而且能把那个杂质峰给分离出来。
    (2)有没有好的方法解决那个120min出来杂质峰,前提是不冲柱子。

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  • 〓猪哥哥〓

    第4楼2010/12/05

    1、采用梯度分
    2、第8针冲洗柱子,如果长期停留在色谱柱,压力也会变化

    wdl158160(wdl158160) 发表:原来小贺啊,嘿嘿!
    你说的太笼统了,帮你补充一下吧:
    1.标准:2010版药典
    2.条件:
    柱子 YMC PACK ODS-A C18
    流动相 甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(18:85:1:0.3)
    柱温 35-40度
    流速 0.8ml/min
    仪器 Agilent1200
    3.问题:
    (1)主峰本就有点拖尾,主峰后有个杂质峰和其混在一起分不开,一般看不出来,加在一起就像是一个拖尾严重的峰,其实是两个成分,分不开!
    (2)样品在120min左后有个大的杂质峰,我们采集时间设为15min,在大批量连续进样到8针左右,这个杂质峰就会出来,把基线抬的很高(15min的采集时间里有一半都受影响),控制不好就会和绿原酸峰重叠到一起,影响测定。
    4.提问:
    (1)有没有相关经验的人给推荐个更适合的柱子,使绿原酸峰不拖尾,而且能把那个杂质峰给分离出来。
    (2)有没有好的方法解决那个120min出来杂质峰,前提是不冲柱子。

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  • wangkun0538

    第5楼2010/12/07

    绿原酸很好做,我们也经常做,我们没有用专用柱子

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  • wdl158160

    第6楼2010/12/08

    哦,那你们分析的什么样品中的绿原酸呢,流动相是什么配比的?

    wangkun0538(wangkun0538) 发表:绿原酸很好做,我们也经常做,我们没有用专用柱子

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  • wdl158160

    第7楼2010/12/08

    1、采用梯度分
    2、第8针冲洗柱子,如果长期停留在色谱柱,压力也会变化

    我们采用的就是8针一冲柱子,采用梯度得做方法验证,麻烦,药典也不允许!

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  • 青林

    第8楼2010/12/19

    采用梯度得做方法验证?

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