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枳葛保肝颗粒中葛花和枳椇子提取工艺及含量测定的研究
一、实验目的
酒精中毒问题已成为严重的社会问题，过度的饮酒，则会引起慢性乙醇中毒、心肌乏力，肾功能衰竭等症状，对人体消化、神经、循环等系统造成严重损害，还会损脏腑、耗气血，严重危害人体健康。葛花和枳椇子是中国传统医学中最具代表性的解酒药物。对急性酒精性肝损伤具有保护作用。研究葛花和枳椇子的最佳提取工艺，测定葛花中鸢尾苷和枳椇子中槲皮素的含量
二、实验部分
1 葛花提取工艺及含量测定的研究。
Ⅰ高效液相法测定葛花中鸢尾苷的含量
色谱条件：
色谱柱：DiamosilC18(2)（5μm，150×4.6mm）；
柱温：室温；
流动相：乙腈：水（20：80）；
波长：265nm；
流速：1.0ml/min 。
进样量为20μl
分离度大于1.5
理论塔板数按鸢尾苷峰计算，大于2000
线性关系的考察
分别吸取6个浓度（1.1μɡ/mL、2.2μɡ/mL、4.4μɡ/mL、8.8μɡ/mL、22μɡ/mL、33μɡ/mL)的对照品溶液20μL，在上述色谱条件下分别进样，测定峰面积。以峰面积Y（千伏）为纵坐标，对照品浓度X（μɡ/mL）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=0.1781X-0.0056 ，R =0.9999，实验结果表明鸢尾苷在1.1μɡ/mL~33μɡ/mL范围内线性关系良好。（见图）
精密度实验：取同一对照品溶液，重复进样5次，测定精密度。峰面积的RSD 为1.3%（n=5）。表明精密度良好。
稳定性实验：取同一样品溶液，在0，2，4，8，12h分别按上述色谱条件进样，测得峰面积的 RSD 为2.47%（n=5）。结果表明，供试品溶液在12小时内稳定。
加样回收率实验:精密称取已知鸢尾苷含量的葛花提取物（4.015%）六份，分别精密加入一定浓度的鸢尾苷对照品适量，用甲醇超声溶解，并定容于10ml容量瓶中，过滤。分别进样，根据峰面积计算含量，计算加样回收率的RSD为2.0%（n=6)。表明准确度良好。
含量测定：分别吸取对照品溶液和样品溶液各20μl，进样，色谱图如下（上：对照品；下：样品溶液）
Ⅱ葛花提取工艺的研究
葛花的正交设计试验
由表中可知，A1B1C2为最佳方案。即40%乙醇溶液提取两次，第一次14倍量提取1.5h、第二次12倍量提取1.0小时。
2、枳椇子提取工艺及含量测定的研究
Ⅰ高效液相法测定枳椇子中槲皮素的含量
色谱条件
色谱柱：Platisil（铂金)ODS(5μm,250×4.6mm）；
柱温：室温；
流动相：乙腈：水（40：60）用0.4%的磷酸调PH=4.1；
波长：360nm；
流速：1.0ml/min
进样量为20μl
槲皮素相邻峰分离度>1.5
理论塔板数以槲皮素计算，应不得低于2000
线性关系的考察：分别吸取5个浓度（2.5μg/ml、5.0 μg/ml、 10μg/ml 、25μg/ml、 40μg/ml 、50μg/ml ）的对照品溶液20μL，在上述色谱条件下分别进样，测定峰面积。以峰面积Y（千伏）为纵坐标，对照品浓度X（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=0.1243X-0.1542 ，R=0.9998
实验结果表明槲皮素在2.5μg/ml~50μg/ml范围内线性关系良好。（见图）
精密度实验：精密量取同一对照品溶液 20μl，重复进样，测定精密度。结果RSD 为2.14%（n=5）。表明精密度良好。
稳定性实验：取同一样品溶液，在0，2，4，8，12h分别按上述色谱条件进样，测得峰面积的 RSD 为2.25%（n=5）。结果表明，供试品溶液在12小时内稳定。
加样回收率实验：精密称定已知槲皮素含量（0.4%）的枳椇子提取物9份，分别精密加入高、中、低浓度槲皮素对照品适量,每一浓度3份。用甲醇定容于10ml容量瓶中。用0.45μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。依法测定。计算加样回收率的RSD为2.6%（n=9)。表明准确度良好。
含量测定：分别吸取对照品和样品溶液各20μl，进样，色谱图如下(上：对照品；下：样品）
Ⅱ 枳椇子提取工艺的研究
枳椇子的正交设计试验
因素水平表
| 水平 | A提取时间（h） | B乙醇浓度（%） | C乙醇用量（倍） |
| 1 | 1.0 | 30 | 8 |
| 2 | 1.5 | 50 | 10 |
| 3 | 2.0 | 70 | 12 |
由表中可知，A2B2C3为最佳方案。即加入12倍量的50%乙醇溶液提取1.5h。
本实验以鸢尾苷为指标，通过正交试验法优选葛花的最佳提取工艺为：药材加40%乙醇溶液提取两次，第一次14倍量提取1.5h、第二次12倍量提取1.0小时。
以槲皮素为指标，通过正交试验法优选枳椇子的最佳提取工艺为：药材加12倍量的50%乙醇溶液提取1.5h。
在参考有关文献的基础上，经多次实验，摸索出了文中的色谱条件，在该条件下，待测成分与相邻峰达到了基线分离，且峰型较好，且具有较好的重现性，可分别用于葛花和枳椇子的含量测定。
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