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【求助】岛津工作站自动积分和分离度是否准确可信?

  • angelachen
    2011/01/14
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 各位液相高手、牛人们好:
    我是一个液相菜鸟,初学液相但是要靠它毕业。
    现在,要建立一种氨基酸的检测方法。 参考了文献和师姐跑18中常规氨基酸的做法, 但是效果不好。自己做了改进,跑标样又快又好,跑样品就分不开峰了。于是老师让我用响应曲面法做方法优化,于是我用box-behnken法,选取缓冲盐pH值【6.0、6.4、6.8】和有机相比例【5%、8%、11%】,目标峰的保留时间和与相邻峰的最小分离度为指标。昨晚通宵做了一遍,但是,数据不好。保留时间的模型拟合度还有0.96,分离度的就只有0.65了。。

    岛津工作站自动算的分离度很诡异,想请教一下大家,究竟分离度怎么算的呀?

    啊,为什么图上看起来明明就没分开,峰尾连着个小峰,但是分离度有2.159;有一个分离得不错,但是分离度有23.9?这也太大了吧?而且很诡异的是,明明是同样两个峰,我求它们的分离度,但每个峰都有一个分离度,而且数值还不一样,不能理解啊不能理解,于是优化出来的结果,分离度的模型拟合度才0.65,完全不行。。

    大家都是这么做方法优化的啊? 选什么因素,以及什么指标来考察分离方法的优劣啊?

    设备:
    岛津高效液相色谱仪,其中包括LC210ATvp 泵两台、SPD210Avp 紫外检测器1 台、CBM-10Avp 系统控制器1
    台。
    色谱条件:
    Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 柱温38 ;检测波长246nm(师姐和文献都用254 nm,但我发现246的峰会比254的高,具体用多少,打算再做一次全扫描看看)进样量10μL


    流动相A0.1 mol/ L 醋酸钠乙腈(体积比为973) 溶液;

    流动相B乙腈(体积比为41) 溶液。

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  • huading

    第1楼2011/01/14

    Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 应该是Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×4.6 mm ) 吧,色谱柱没有那么粗的(或长的)吧

    angelachen(angelachen) 发表:......



    设备:岛津高效液相色谱仪,其中包括LC210ATvp 泵两台、SPD210Avp 紫外检测器1 台、CBM-10Avp 系统控制器1 台。
    色谱条件:
    Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 柱温38 ;检测波长246nm(师姐和文献都用254 nm,但我发现246的峰会比254的高,具体用多少,打算再做一次全扫描看看)进样量10μL


    流动相A0.1 mol/ L 醋酸钠乙腈(体积比为973) 溶液;

    流动相B乙腈(体积比为41) 溶液。

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  • angelachen

    第2楼2011/01/14

    嗯嗯,对对,我错了~~>n<

    yueer(yueer) 发表:Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 应该是Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×4.6 mm ) 吧,色谱柱没有那么粗的(或长的)吧

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  • 有水有渝

    第3楼2011/01/15

    应助达人

    把图和积分表截一上来看看。分离度有专门的公式,你随便搜一下就有。眼睛有时是看不准的。

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  • 〓猪哥哥〓

    第4楼2011/01/19

    关键还是看图。图难看,分离度再大也没用。下面的分离度数据是不是看错了。

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  • zhao1025

    第5楼2011/01/20

    软件本来也是要做验证的。关于你的问题汗简单,你自己算下分离度然后再与软件自动算的对下不就OK了。不要说不知道怎么计算或者不知道参数没法获得,是在不行自己量下

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  • 1818

    第6楼2011/01/21

    楼主可以把图传上来,让大家给分析分析

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  • 天涯

    第7楼2011/01/21

    可以调一下积分参数,看看有没有变化,漂移太高也不好。

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