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【求助】岛津工作站自动积分和分离度是否准确可信？

angelachen

2011/01/14

液相色谱（LC）

各位液相高手、牛人们好：
我是一个液相菜鸟，初学液相但是要靠它毕业。
现在，要建立一种氨基酸的检测方法。参考了文献和师姐跑18中常规氨基酸的做法，但是效果不好。自己做了改进，跑标样又快又好，跑样品就分不开峰了。于是老师让我用响应曲面法做方法优化，于是我用box-behnken法，选取缓冲盐pH值【6.0、6.4、6.8】和有机相比例【5%、8%、11%】，目标峰的保留时间和与相邻峰的最小分离度为指标。昨晚通宵做了一遍，但是，数据不好。保留时间的模型拟合度还有0.96，分离度的就只有0.65了。。

岛津工作站自动算的分离度很诡异，想请教一下大家，究竟分离度怎么算的呀？

啊，为什么图上看起来明明就没分开，峰尾连着个小峰，但是分离度有2.159；有一个分离得不错，但是分离度有23.9？这也太大了吧？而且很诡异的是，明明是同样两个峰，我求它们的分离度，但每个峰都有一个分离度，而且数值还不一样，不能理解啊不能理解，于是优化出来的结果，分离度的模型拟合度才0.65，完全不行。。

大家都是这么做方法优化的啊？选什么因素，以及什么指标来考察分离方法的优劣啊？

设备：岛津高效液相色谱仪,其中包括LC210ATvp 泵两台、SPD210Avp 紫外检测器1 台、CBM-10Avp 系统控制器1 台。
色谱条件：
Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 柱温38 ℃；检测波长246nm（师姐和文献都用254 nm，但我发现246的峰会比254的高，具体用多少，打算再做一次全扫描看看）；进样量10μL 。

流动相A：0.1 mol/ L 醋酸钠—乙腈(体积比为97∶3) 溶液;

流动相B：乙腈—水(体积比为4∶1) 溶液。

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huading

第1楼2011/01/14

Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 应该是Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×4.6 mm ) 吧，色谱柱没有那么粗的（或长的）吧
angelachen(angelachen) 发表:......

设备：岛津高效液相色谱仪,其中包括LC210ATvp 泵两台、SPD210Avp 紫外检测器1 台、CBM-10Avp 系统控制器1 台。
色谱条件：
Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 柱温38 ℃；检测波长246nm（师姐和文献都用254 nm，但我发现246的峰会比254的高，具体用多少，打算再做一次全扫描看看）；进样量10μL 。

流动相A：0.1 mol/ L 醋酸钠—乙腈(体积比为97∶3) 溶液;

流动相B：乙腈—水(体积比为4∶1) 溶液。

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angelachen

第2楼2011/01/14

嗯嗯，对对，我错了～～>n<
yueer(yueer) 发表:Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 应该是Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×4.6 mm ) 吧，色谱柱没有那么粗的（或长的）吧

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有水有渝

第3楼2011/01/15

应助达人

把图和积分表截一上来看看。分离度有专门的公式，你随便搜一下就有。眼睛有时是看不准的。

0

〓猪哥哥〓

第4楼2011/01/19

关键还是看图。图难看，分离度再大也没用。下面的分离度数据是不是看错了。

0

zhao1025

第5楼2011/01/20

软件本来也是要做验证的。关于你的问题汗简单，你自己算下分离度然后再与软件自动算的对下不就OK了。不要说不知道怎么计算或者不知道参数没法获得，是在不行自己量下

0

1818

第6楼2011/01/21

楼主可以把图传上来,让大家给分析分析

0

天涯

第7楼2011/01/21

可以调一下积分参数，看看有没有变化，漂移太高也不好。

0

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