仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
1
1
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
食品检测
>
食品毒素/微生物检测
>
帖子详情
【分享】流感病毒的MDCK细胞分离方法
去年冬天
2011/01/15
私聊
食品毒素/微生物检测
一、目的
流感病毒的MDCK细胞分离方法是流感实验的关键技术,用于流感病毒的分离、培养。本SOP是为确保MDCK细胞分离流感病毒的操作准确、规范和可靠而制定。
二、范围
适用于实验室所有技术人员进行流感病毒的MDCK细胞分离。
三、程序
(一)生物安全要求
H5,H7亚型高致病性禽流感病毒,H2N2亚型流感病毒的MDCK细胞分离实验室生物安全级别:BSL-3。实验操作人员需进行BSL-3防护,具体详见“生物安全个人防护SOP”。H5,H7亚型高致病性禽流感病毒,H2N2亚型流感病毒的MDCK细胞分离操作必须在BSL-3级实验室的生物安全柜中进行。
其余流感病毒的MDCK细胞分离实验室生物安全级别:BSL-2。实验操作人员需进行BSL-2防护,具体详见“生物安全个人防护SOP”。其余流感病毒的MDCK细胞分离操作必须在BSL-2级实验室的生物安全柜中进行。
(二)材料
1、75%~90%成片的MDCK细胞,选用合适大小的细胞培养瓶和细胞培养板来用做病毒分离
2、胰酶(牛胰腺来源Ⅷ型)
3、HEPES缓冲液,1M母液
4、D-MEM培养基,Hank's液
5、青、链霉素母液(10000U/mL 青霉素G;10000µg/mL硫酸链霉素
6、牛血清白蛋白组分Ⅴ,7.5%溶液
7、临床样品0.5mL
8、1mL无菌移液管
9、10mL无菌移液管
10、15mL无菌离心管
(三)实验步骤
1、准备病毒生长液
(1)细胞维持液准备
500mL D-MEM液中加入
①青、链霉素母液 5mL(终浓度达:100U/mL青霉素;100µg/mL链霉素)
②牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL(终浓度:0.2%)
③HEPES缓冲液 12.5mL(终浓度:25mM)
(2)病毒生长液
每500mL细胞维持液中加入0.5mL的TPCK-胰酶(母液浓度为2mg/mL)使TPCK-胰酶的终浓度为2µg/mL。
2.流感病毒MDCK细胞分离步骤:
(1)75%~90%成片细胞的准备,以选取T25细胞瓶为例。
①用40×物镜观察细胞生长状态。
②轻轻倒出细胞生长液,用10mL的无菌移液管吸取6mL Hank's液分别清洗细胞3遍。
(2)细胞培养瓶的接种
①用无菌的移液管将清洗细胞的Hank's液从细胞培养瓶中移出。
②用无菌的移液管吸取适量临床标本置于细胞培养瓶中,温和摇动数次。
③然后放于37℃,5%CO2培养箱中吸附1~2h。
④吸出接种物,用10mL的无菌移液管吸取6mL Hank's液分别清洗细胞2遍。然后加入6mL病毒生长液于细胞培养瓶中。
⑤放置于33~35℃培养箱培养。
⑥每日观察细胞病变情况。(细胞病变的特征是细胞肿胀圆化,细胞间隙增大,细胞核固缩或破裂,严重时细胞部分或全部脱落)。
(3)细胞培养物的收获
当75%~100%细胞出现病变时进行收获,收获之前可以将细胞放于-70℃冰箱,冻融1~2次,以提高收获标本的病毒滴度。即使无细胞病变也应该于接种后第7天收获。收获病毒液时,先温和摇动细胞瓶数次,然后用10mL的无菌移液管吸取病毒液置于15mL无菌离心管中,混匀病毒。收获的病毒液可以立即进行后续试验,或冻于-80℃冰箱待以后试验使用。
相关话题
1
【转帖】美国超市出售的部分肉类制品中发现“超级细菌”
2
【讨论】每日一题(38)有奖问答
3
【讨论】每日一题(39)(有奖问答)
4
【讨论】微生物检测问题
5
【分享】药品微生物实验室规范指导原则
+关注
私聊
hys20080429
第1楼
2011/02/19
学习了,谢谢楼主分享。
0
发表回复
近期热榜
赛默飞实验室产品焕新计划有奖调研!
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
报名开启:ICS2024第十三届光谱网络会议!
推荐收藏!盘点中药材及饮片检测解决方案
热门活动
甄选国优仪器,助推设备更新
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
大家有没有用过微生物快速检测仪推荐一下
求助
2019/04/08
【分享】菌种鉴定方法
2011/03/31
每日一题(147)(有奖问答)
讨论
2011/11/08
微生物习题讨论(跟帖有奖)
讨论
2014/09/16
关于酶标仪测OD570nm(630nm校准),什么意思,怎么操作啊
求助
2012/05/30
采集直饮水 所使用的 样品采集瓶 大家是如何灭菌的
讨论
2011/11/09
【分享】各个国家食品微生物限量规定
2011/03/07
【讨论】人体内的毒素,是食物直接带入的还是在体内转化的?
2011/05/02
食品微生物检测仪有哪些用途
分享
2024/07/05
atp荧光检测仪使用范围
资料
2024/07/04
为什么“千级、万级标准”是一个标准
求助
2024/07/02
急
已应助
2024/06/29
真菌毒素检测仪检定规程介绍
分享
2024/06/20
袋装酱腌菜灭菌办法
已应助
2024/06/14
这忽冷忽热的
原创
2024/06/14
GB4789.3中-典型大肠菌群是什么意思
已应助
2024/05/31
检测报告一定要有判定结果吗?
求助
2024/07/01
气相FID重现性不好原因
求助
2024/07/01
求助安捷伦GC7890B,EPC无响应解决办法
求助
2024/07/01
‘有奖问答’对错题’:用抽样方案(30,0)对产品批进行连续验收,当批不合格品率为1%时,方案的接收概率为73.97%,则平均检出质量为( )。
讨论
2024/07/05
HJ1332便携非甲实际应用问题
讨论
2024/07/01
如何做好体系工作?
分享
2024/07/01
多人主检的报告,检测审核应该怎么签字
求助
2024/07/05
EI源的灯丝镉厂家通用吗?
求助
2024/07/03
【求助】leco cs230漏气
2011/01/15
【已应助】求文献五篇(均有链接)
2011/01/15
【讨论】TS,VS的问题
2011/01/15
【讨论】水不溶物的测定
2011/01/15
【讨论】挥发性脂肪酸的测量
2011/01/15
【转帖】关于CNAS-CL07《测量不确定度的要求》(修订)网上征求意见的通知
2011/01/15
【求助】库尔特LS-100Q使用问题
2011/01/15
【试验箱普及】之盐雾试验箱
2011/01/15
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...