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【求助】样品检测相关问题，怎么解决？？

wangjialin1810

2011/02/12

液相色谱（LC）

大家好。
测量一种小分子的药物。测试条件是Waters的仪器，用C18柱，内径4mm，自动进样。
按照文献报道，采用的流动相 A：PBS(M=0.08M,pH=3), B：乙腈 A：B=65：35

在实验过程中遇到如下问题想请教下大家。
1. 配置PBS缓冲液后，用孔径0.45的PALL滤纸在砂芯漏斗上减压过滤过滤。因为先过滤的纯水，没什么问题。接着过滤PBS缓冲液的时候，流速特别慢，几乎是到了每秒才一滴，影响了实验的速度。经检测，不是漏斗的问题，因为先前过滤水的时候没问题；滤纸拿下，直接用砂芯漏斗抽滤纯水也没问题。于是怀疑是滤纸有问题。我每次都是用同一张滤纸先过滤纯水，再滤PBS。想问下大家，用0.45的滤纸过滤PBS为什么会那么慢呢? 会堵塞滤纸吗？

2.看到大家议论说，PBS缓冲液的浓度不能太大。我采用文献中的0.08M，与乙腈的比为 65：35，没有发现柱子被堵。请问这样子是不是很冒险啊。还是把浓度降低到0.01M比较保险？

3. 测试前，要将准备走PBS的通道先用纯水冲先冲洗30min是吗？比如我准备用A：PBS，B：乙腈，实验开始的时候先用乙腈稳定仪器30min,一般都是再直接用和实验条件一样的流动相配比平衡柱子1h。此次实验中因为有PBS，是不是再应该用纯水冲洗B通道冲洗30min 呢？如果是，那么此时的冲洗条件该怎么设置，乙腈和水的比例为多少比较合适呢？

4. 实验结束后，也需要用纯水冲洗色谱柱。我直接将通PBS的通道换成纯水，然后用水：乙腈=95：5冲洗30min，再用乙腈冲洗30min。最后将色谱柱保存在纯乙腈中，这样是否合理？

5.两天两次相同条件的实验，我就测一个纯的HPLC级的物质，出峰时间由7.2min推迟到8.2min左右。这会是哪些原因引起的呢？我实验的温度是仪器恒温30度。

谢谢大家！

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looye2006

第1楼2011/02/12

1、堵？操作问题？
2，不冒险，柱子和仪器，这点盐浓度还是可以耐的
3、要用高水相过渡，否则有盐析，比如70：30 H2O:ACN
4、合理
5、可能室温不稳定

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该帖子已被版主-〓猪哥哥〓加2积分，加2经验;加分理由:交流

wangjialin1810

第2楼2011/02/12

谢谢交流。
我过滤的操作应该不存在问题的，因为直接拿过滤完纯水的装置再过滤PBS的。滤纸是PALL 公司0.45的。一般过滤PBS会堵吗？
室温不稳定也有点可能~
looye2006(looye2006) 发表:1、堵？操作问题？
2，不冒险，柱子和仪器，这点盐浓度还是可以耐的
3、要用高水相过渡，否则有盐析，比如70：30 H2O:ACN
4、合理
5、可能室温不稳定

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该帖子已被版主-〓猪哥哥〓加1积分，加2经验;加分理由:反馈

wangjialin1810

第3楼2011/02/12

1. PALL 是US的一个公司，我用的是他家的滤纸，水系，0.45的。就是不确定为什么会流不动PBS。
3.我是每次都将水相和有机相的通道交换使用，以防止滤头长菌的。
5.不是两天只进了两针。我是第一天测得一个样，不同浓度，均是在7.2min出峰，第二天也是同样条件，却在8.2min出峰的。柱压变化不大呢。

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