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【求助】药物测定相关问题，请教！！！

wangjialin1810

2011/02/12

化学药检测

大家好。
测量一种小分子的药物。测试条件是Waters的仪器，用C18柱，内径4mm，自动进样。
按照文献报道，采用的流动相 A：PBS(M=0.08M,pH=3), B：乙腈 A：B=65：35

在实验过程中遇到如下问题想请教下大家。
1. 配置PBS缓冲液后，用孔径0.45的PALL滤纸在砂芯漏斗上减压过滤过滤。因为先过滤的纯水，没什么问题。接着过滤PBS缓冲液的时候，流速特别慢，几乎是到了每秒才一滴，影响了实验的速度。经检测，不是漏斗的问题，因为先前过滤水的时候没问题；滤纸拿下，直接用砂芯漏斗抽滤纯水也没问题。于是怀疑是滤纸有问题。我每次都是用同一张滤纸先过滤纯水，再滤PBS。想问下大家，用0.45的滤纸过滤PBS为什么会那么慢呢? 会堵塞滤纸吗？

2.看到大家议论说，PBS缓冲液的浓度不能太大。我采用文献中的0.08M，与乙腈的比为 65：35，没有发现柱子被堵。请问这样子是不是很冒险啊。还是把浓度降低到0.01M比较保险？

3. 测试前，要将准备走PBS的通道先用纯水冲先冲洗30min是吗？比如我准备用A：PBS，B：乙腈，实验开始的时候先用乙腈稳定仪器30min,一般都是再直接用和实验条件一样的流动相配比平衡柱子1h。此次实验中因为有PBS，是不是再应该用纯水冲洗B通道冲洗30min 呢？如果是，那么此时的冲洗条件该怎么设置，乙腈和水的比例为多少比较合适呢？

4. 实验结束后，也需要用纯水冲洗色谱柱。我直接将通PBS的通道换成纯水，然后用水：乙腈=95：5冲洗30min，再用乙腈冲洗30min。最后将色谱柱保存在纯乙腈中，这样是否合理？

5.两天两次相同条件的实验，我就测一个纯的HPLC级的物质，出峰时间由7.2min推迟到8.2min左右。这会是哪些原因引起的呢？我实验的温度是仪器恒温30度。

谢谢大家！

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该帖子已被版主-www加3积分，加2经验;加分理由:提问所给信息完整~

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gcm-nj

第1楼2011/02/12

不知道说的对否，仅供参考：
1、新鲜配制的缓冲液没有遇见过流速很慢的问题，每次从冰箱中拿出来会有堵的现象，应该是有颗粒析出吧。
2、资料中一般好像是不大于0.05M。
3、我一般做含盐的品种，平衡时是用含有机相10%的水冲30min。
4、实验结束我也是用含有机相的水冲，纯水冲对柱子不好吧。
5、两次用的流动相是一瓶吗？有没有完全平衡。时间漂原因很多，不知道你的具体情况。

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该帖子已被版主-加5积分，加2经验;加分理由:感谢应助

wangjialin1810

第2楼2011/02/13

谢谢交流，对我帮助很大。
两次的流动相不是一瓶，每次都是单独再配的，
可能这也是保留时间变化的一个原因吧。
gcm-nj(gcm-nj) 发表:不知道说的对否，仅供参考：
1、新鲜配制的缓冲液没有遇见过流速很慢的问题，每次从冰箱中拿出来会有堵的现象，应该是有颗粒析出吧。
2、资料中一般好像是不大于0.05M。
3、我一般做含盐的品种，平衡时是用含有机相10%的水冲30min。
4、实验结束我也是用含有机相的水冲，纯水冲对柱子不好吧。
5、两次用的流动相是一瓶吗？有没有完全平衡。时间漂原因很多，不知道你的具体情况。

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往往外

第3楼2011/02/14

应助达人

赞同一楼的说法~

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青林

第4楼2011/02/23

也有可能是滤纸的问题。换成中速的看看！

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