【二虎笔记15】动力学分光光度法

初学者&九点虎

2011/02/19

私聊

紫外可见分光光度计（UV）

动力学分光光度法（kinetic spectrophotometry）是利用反应速率与反应物，反应产物或催化剂的浓度之间的定量关系，通过测量与反应速率成比率关系的吸光度，来定量样品溶液中待测组分的浓度。

这种方法要选择一个反应速率与待测组分浓度相关的指示反应，且要求这个指标反应的反应物与产物的吸收光谱不同，反应速率适中，测量吸光度的瞬间待测组分浓度不变等。

1 动力学分光光度法定量基础

令某以基本反应如下：K为催化剂

M+N P+Q

在其他条件固定时，则反应速率方程为：

=k[M][N][k] (1)

反应初期，如控制M和N浓度较大，则基本反应速率主要决定微量催化剂k的浓度。

=k₁[k] (2)

积分得 [N]= k₁ [k]t (3)

根据朗伯-比尔定律[N]=A/εL,则（3）式变为

A= k₁εL[k]t= k₂[k]t （4）

其中 k₂= k₁εL

按（4）式，便可通过测得产物P或Q的吸光度A，对催化剂k浓度定量。

2 测量方法

2.1在t时刻，终止基本反应，然后测定反应产物吸光度A，则

A= k₂[k]t= k₃[k] （5）

绘制A-[k]标准曲线，通过测量样品溶液A后，在标准曲线上求[k]浓度。

2.2测定样品溶液的吸光度A达到某以预定值所需时间，则

[k]= = k₄（5）

绘制[k]- 标准曲线，通过测定样品溶液A后，在标准曲线上查出[k]含量。

2.3将（4）式改写成 = k₂[k],则A-t曲线的斜率就是 =tga。因此，首先由不同浓度的k标准溶液在不同时间t测得的吸光度A值，绘制t-A关系曲线，求出对应k浓度下的tga（斜率），再绘制k- tga标准曲线。

通过测定样品溶液在t时刻的A求出tga，则在标准曲线上克查出对应k的含量。

3催化动力学分析中进行定量的方法：固定时间法，固定浓度法，这两种方法度涉及到在反应时间接近于零的情况下做两种测定：

3.1固定时间法：需要在固定时间间隔做两个吸光度的测定；

3.2固定浓度法：需要测量吸光度从一个预定值变成另一个预定值所用的时间。

4应用

4.1利用酶的催化作用，加速反应很快的进行到终点，测定产物的浓度，计算出样品中被测物质的含量。

4.2利用酶催化基质反应测量其反应速度，由反应速度的大小计算出样品中基质的含量。

4.3利用酶催化基质反应测定样品中酶或活性剂或抑制剂的浓度。