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【讨论】液相别冷清,大家来讨论标准曲线的问题,另附爆力美图

液相色谱(LC)

  • 最近做液相的标曲,翻出领导以前认证时做的曲线来对照一下.
    仪器是AGILENT1100,二元泵,手动进样。
    领导的做法:先配制一个500ug/ml的高浓度,再分别稀释成1ug/ml和5ug/ml,然后以1ug/ml的标样进样2ul、5ul、10ul和20ul,再以5ug/ml的标样进样10ul,那么就以2ng、5ng、10ng、20ng和50ng所对应的响应做成标准曲线。
    我的做法:配制0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml、0.5ug/ml和1.0ug/ml的标液进样,以前面5个浓度对响应做曲线。
    结果对比:15种物质的混标,取其中一种物质的曲线来说,领导的:Y=39.96X+6.47,R2=0.992,其他十四种也基本如此。我的:y = 708.66x + 8.81
    R2=0.9998,其他十四种R=1.
    我觉得领导的做法有问题,但他说是一样的,没问题,大家觉得呢?如果你是评审老师你会让它通过吗?


    发图片像灌水,还是删除其他的吧,留下的这张图比较有质感,大家可以接受吧,

    言归正传,为什么第一种做法与第二种的曲线存在较大差异,我总结了几点,大家看看,有问题望大家指正

    第一:手动进样,重现性不好,尤其在进2ul,5ul时。公司有几个同事做液相,大家打针的方式有所不同,分三种:1,将针插入六通阀,推一下,半秒钟后,再推一下,再半秒后再推一下,直至推完。2,将针插入六通阀后,轻轻一推,收工。3,将针插入六通阀后,猛的一推。同一样品,三人依次进同样体积,得到的响应还是有点差异的。第3种推法,响应最高,但我想,无论你用哪种推法,保证重现性才是最终目的。所以我选第2种,轻轻一推,匀速推进,尽量使每次力道相同。
    第二:进不同体积引起更大误差,这个观点大家都认同。
    第三:以绝对质量对响应做曲线,很多资料都不提倡计算绝对质量,这会引起更大误差,也许跟这里的曲线不好无关,但跟定量误差会有很大关系。
    第四:对液相进样装置六通阀的误解,尤其是做过气相的人。他们会认为我打多少体积的液体进去,就是多少,不同的体积与响应会成线性,理论上气相是这样,但到液相这里就不是这样了。论坛上有几个帖子|HPLC六通阀进样器的使用及保养,相信大家都看过,进样20ul,实际只打进了75%也就15ul的液体,进其它体积是不是也只有75%就难说了,不过各厂家的阀不同,但也基本如此。如你想真正进20ul,就不得不大体积进样,这跟液体的物理知识有关。所以说不同体积是难成线性的。
    所以说如果我是评审老师,那么我肯定要开不符合项或者是严重缺陷。
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  • 有水有渝

    第1楼2011/03/18

    应助达人

    我推荐改变进样浓度的做法,可以消除进样量改变对峰面积的影响,改变进样量的做法对仪器的要求高,同时引入变数,虽然结果可能相差不大。

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  • AK-47(冲)

    第2楼2011/03/18

    你的做法合理一些。从结果来看也知道的。

    这图很暴力。。做的是什么实验?

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  • yuduoling

    第3楼2011/03/18

    从图片看,确实很暴力

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  • huangpc

    第4楼2011/03/18

    看图片貌似搞爆破的啊……

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  • jxlcfld

    第5楼2011/03/18

    改变进样体积误差应更大!

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  • xhwy2010

    第6楼2011/03/18

    你的做法准确,标准方法应该就是这样做的。手动进样改变进样体积是偷懒的做法,我试过两次,线性较差,所以我得出的结论是:做实验不能偷懒。另外不知楼主把这么难看的图附上来是为什么?

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  • sjbsjbsjb

    第7楼2011/03/18

    做涂料的游离甲醛,第一次做涂料,涂料发泡将馏出的出口堵住,结果。。。。。。

    AK-47(冲)(scott-vip) 发表:你的做法合理一些。从结果来看也知道的。

    这图很暴力。。做的是什么实验?

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  • sjbsjbsjb

    第8楼2011/03/18

    结果相对偏差在10%左右,我的结果要高一些。

    有水有渝(xky0230699) 发表:我推荐改变进样浓度的做法,可以消除进样量改变对峰面积的影响,改变进样量的做法对仪器的要求高,同时引入变数,虽然结果可能相差不大。

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  • sjbsjbsjb

    第9楼2011/03/18

    我想这也跟个人的习惯有关,领导做紫外、原吸气相气质,都以质量对响应来做曲线,而我习惯什么都以浓度对响应做曲线,所以他并不觉得这是偷懒。而且我看过记录,他每个级别的都进了5针,而我每个级别就只进了一针。当他看到我的曲线这么好时,他甚至觉得这是巧合或者是我修改了数据,说我是不是每个都手动积分了。实验室对气相气质重视,因为样多而杂,液相就做一个项目,样品干净,从来不出问题,所以就不太重视,总之一句话,液相,简单,浮云。。。
    上图是觉得液相人气不旺,请见谅,如果您实在觉得不妥,删掉也行。

    xhwy2010(xhwy2010) 发表:你的做法准确,标准方法应该就是这样做的。手动进样改变进样体积是偷懒的做法,我试过两次,线性较差,所以我得出的结论是:做实验不能偷懒。另外不知楼主把这么难看的图附上来是为什么?

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  • xhwy2010

    第10楼2011/03/18

    液相看似简单,实际上有很多学习的地方,尤其是做陌生样品,不同的人做的结果可能会有很大差别。其实个人经验认为气相气质液相色谱条件摸索容易多了,可能前处理麻烦一些。液相色谱要想做好不容易,可得下一番功夫呢,我做了几年,总觉得刚入门,呵呵。

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