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【求助】求助WATERS大侠

液相色谱(LC)

  • 各位老师:

    我们用waters2690分离单元,有人说在升流速的时候,比如冲洗色谱柱的时候,需要0.2的梯度慢慢升至1ml/ml。
    另外,在切换流动相比例的时候,需要把流速缓慢停掉。

    有没有老师可以权威地告诉我,是否需要这么做,并且我看面板上也有一个直接停掉流速的按钮啊,如果对系统有影响应该不会有这么一个功能吧。而且缓慢升流速也很麻烦,是不是有这个必要啊?我注意到我调整流速到1的时候它本身也是缓慢上升的啊。

    另外,我这里的SOP规定在干排气的时候不需注射器抽取液体进行排气,而在WET排气的时候用注射器抽取,但是跟说明书和操作手册刚好弄反了。

    请问,我该怎么做啊?这两种排气方式有差别吗?弄反后有什么坏处?

    谢谢!
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  • 有水有渝

    第1楼2011/03/21

    应助达人

    在切换流动相比例的时候,需要把流速缓慢停掉?
    现在的仪器没有那么娇气,先设置好方法规定的流速,直接开泵或关泵就行了。

    SOP规定在干排气的时候不需注射器抽取液体进行排气?
    什么叫干排气,如果管路里已经充满流动相,直接排气就行了,不用注射器抽取。

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  • 青橙

    第2楼2011/03/21

    很想知道,什么是干排气和湿排气呢?请楼主解释一下吧~~

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  • niraj

    第3楼2011/03/21


    呵,我措辞不当,见笑了。

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  • 有水有渝

    第4楼2011/03/21

    应助达人

    我也是第一次接触这个概念,楼主是不是把两种方法弄错了,dry prime要注射器抽取流动相才对了。

    niraj(niraj) 发表:
    呵,我措辞不当,见笑了。

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  • Sykren

    第5楼2011/03/21

    wet prime 不需要用注射器,直接排气就行
    dry prime 才需要用注射器辅助
    一般都用wet prime,当走空后选择dry prime

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  • niraj

    第6楼2011/03/21

    是啊,我看说明书也是说dry才抽,SOP却写的是WET进行抽,不知道有没有坏处。

    另外请问,在WATERS2690需不需要缓慢改变流速?

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  • flyaway

    第7楼2011/03/22

    关于Dry prime 和wet prime ,肯定是你们的sop 写错了。最好还是改过来,可以减少对脱气机的影响。

    至于流速是否要缓慢升,和色谱柱有很大的关系。相对而言,C18的色谱柱比较耐用,压力的剧烈变化对色谱柱的影响较小,但是一些特别的柱子,例如葡聚糖凝胶的柱子,就需要缓慢提升流速,否则填料容易受损。

    不过,如果你注意过就会发现,即便是开机后直接将流速设置为1.0ml/min,2690/2695/e2695 也会在一定的时间范围内将流速从0提升到1的,换言之,在设计时已经考虑到了流速变化对仪器以及色谱柱的影响。

    (再补充一个有趣的地方:如果流速从0 直接变化为1,仪器的声音很有特色,因此有人说,2695是一台会唱歌的仪器。)

    niraj(niraj) 发表:是啊,我看说明书也是说dry才抽,SOP却写的是WET进行抽,不知道有没有坏处。

    另外请问,在WATERS2690需不需要缓慢改变流速?

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  • niraj

    第8楼2011/03/22

    专家您好,我是否可以将你的建议理解为:

    1,修改SOP成正确的方式
    2,常规分析(C18柱)下不必要缓慢升降流速

    另外,关于切换流动相比例上,这边是建议将流速将为0,并切换成你需要的比例和泵,然后升流速,有必要吗?我认为直接修改比例即可。

    是不是不能,或者说不建议由100%的纯水直接切换至100%有机相(需要过渡)?因为我认为即使您当初是100%纯水,色谱柱在直接切换后也不会立即
    全被取代为有机相的。

    flyaway(flyaway) 发表:关于Dry prime 和wet prime ,肯定是你们的sop 写错了。最好还是改过来,可以减少对脱气机的影响。

    至于流速是否要缓慢升,和色谱柱有很大的关系。相对而言,C18的色谱柱比较耐用,压力的剧烈变化对色谱柱的影响较小,但是一些特别的柱子,例如葡聚糖凝胶的柱子,就需要缓慢提升流速,否则填料容易受损。

    不过,如果你注意过就会发现,即便是开机后直接将流速设置为1.0ml/min,2690/2695/e2695 也会在一定的时间范围内将流速从0提升到1的,换言之,在设计时已经考虑到了流速变化对仪器以及色谱柱的影响。

    (再补充一个有趣的地方:如果流速从0 直接变化为1,仪器的声音很有特色,因此有人说,2695是一台会唱歌的仪器。)

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  • yun96231003

    第9楼2011/03/22

    刚接触Waters515泵,也有相同的困惑。不知流速在多长时间内升到1.0较为合适?
    尝试过不调流速,切换流动相时直接用1.0的流速,但压力会升高得有点离谱。
    希望更多用过WATERS液相的人来交流一下。

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  • syyyl

    第10楼2011/03/22

    sop错!
    那个直接停止的键是应急用的,仪器的流速最好是由小到大的慢慢调,对你的仪器有好处的。

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