【分享】欧盟拟修订多种作物中唑菌胺酯的残留限量

日本厚生省发布的检测方法：

ピラクロストロビン試験法（農産物）

１．分析対象化合物
　ピラクロストロビン

２．装置
　紫外分光光度型検出器付き高速液体クロマトグラフ（HPLC-UV）
　液体クロマトグラフ・質量分析計（LC/MS）

３．試薬、試液
　次に示すもの以外は、総則の３に示すものを用いる。
４．試験溶液の調製
１）抽出
(1)　穀類、豆類及び種実類の場合
　試料10.0ｇに水20 mLを加え、2時間放置する。これにメタノール100 mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物に、メタノール50 mLを加えてホモジナイズし、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせて、40℃以下で約20 mLまで濃縮する。これに５％塩化ナトリウム溶液100 mLを加え、ｎ-ヘキサン100 mL及び50 mLで２回振とう抽出する。抽出液に無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、ろ液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。
　この残留物にｎ-ヘキサン30 mLを加え、ｎ-ヘキサン飽和アセトニトリル30 mLずつで２回振とう抽出する。アセトニトリル層を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物にアセトン及びｎ-ヘキサン（１：19）混液５mLを加えて溶かす。

(2)　果実、野菜及びハーブの場合
　試料20.0ｇに、メタノール100 mLを加え、ホモジナイズした後、吸引ろ過する。ろ紙上の残留物に、メタノール50 mLを加えてホモジナイズし、上記と同様にろ過する。得られたろ液を合わせて、40℃以下で約20 mLまで濃縮する。これに５％塩化ナトリウム溶液200 mLを加え、ｎ-ヘキサン100 mL及び50 mLで２回振とう抽出する。抽出液に無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、無水硫酸ナトリウムをろ別した後、ろ液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物にアセトン及びｎ-ヘキサン（１：19）混液５mLを加えて溶かす。

２）精製
(1)　シリカゲルカラムクロマトグラフィー
　クロマトグラフ管（内径15 mm）に、カラムクロマトグラフィー用シリカゲル（粒径63～200μm）５ｇをｎ-ヘキサンに懸濁させて充てんし、無水硫酸ナトリウム５ｇを積層する。このカラムに、１）で得られた溶液を注入した後、アセトン及びｎ-ヘキサン（１：19）混液45 mLを注入し、流出液は捨てる。次いでアセトン及びｎ-ヘキサン（３：17）混液50 mLを注入し、溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物にアセトン及びｎ-ヘキサン（１：19）混液３mLを加えて溶かす。

(2)　エチレンジアミン-N-プロピルシリル化シリカゲルクロマトグラフィー
　エチレンジアミン-N-プロピルシリル化シリカゲルミニカラム（500 mg）にアセトン、ｎ-ヘキサン及びアセトン及びｎ-ヘキサン（１：19）混液各10 mLを順次注入し、各流出液は捨てる。このカラムに(1)で得られた溶液を注入した後、アセトン及びｎ-ヘキサン（１：19）混液12 mLを注入し、溶出液を40℃以下で濃縮し、溶媒を除去する。この残留物をアセトニトリル及び水（３：２）混液に溶解し、穀類、豆類及び種実類の場合は正確に４mL、果実、野菜及びハーブの場合は正確に８mLとしたものを、孔径0.45μmのメンブランフィルターを用いてろ過し、試験溶液とする。

５．検量線の作成
　ピラクロストロビン標準品の0.025～0.5 mg/Lアセトニトリル及び水（３：２）混液溶液を数点調製し、それぞれ20μLをHPLCに注入し、ピーク高法又はピーク面積法で検量線を作成する。

６．定量
　試験溶液20μLをHPLCに注入し、５の検量線でピラクロストロビンの含量を求める。

７．確認試験
　LC/MSにより確認する。

８．測定条件
１）HPLC
　検出器：UV（波長275 nm） 　カラム温度：40℃
　移動相：アセトニトリル、水及びメタノール（11：８：１）混液
　保持時間の目安：21分

２）LC/MS 　カラム温度：40℃ 　イオン化モード：ESI（＋）
　主なイオン（m/z）：388
　注入量：２μL
　保持時間の目安：19分

９．定量限界
　0.01 mg/kg

１０．留意事項
１）試験法の概要
　ピラクロストロビンを試料からメタノールで抽出し、ｎ-ヘキサンに転溶する。果実、野菜及びハーブはそのまま、穀類、豆類及び種実類の場合はアセトニトリル/ヘキサン分配で脱脂した後、シリカゲルカラム及びエチレンジアミン-N-プロピルシリル化シリカゲルミニカラムにより精製し、HPLC-UVで測定、LC/MSで確認する方法である。

２）注意点
１１．参考文献
　なし

１２．類型
　C