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【求助】关于β胡萝卜素的液相测定方法，十万火急，请君指教

梦难求

2011/05/25

液相色谱（LC）

目前一些国内外的文献包括国标方法几乎都是反向液相色谱法，主要以C18柱，甲醇乙腈或者含二氯甲烷为流动相分析β胡萝卜素，该方法致使峰宽过大，出峰时间太长（30min都难出峰）。
如果用硅胶柱，正相色谱法，分析时间只要3到5分钟左右，但是有些人说，β胡萝卜素在正相色谱中不稳定。
鄙人才疏学浅，对这方面不是很了解，正相中为什么不稳定呢？
反向色谱分析β胡萝卜素需要那么长时间为什么大家都还用反向，正相色谱法真的不可取吗？

对样品的前处理基本都是采用高浓度碱醇溶液中皂化，最后要水洗，水洗层与有机层两者之间晃动后会产生果冻状的物质，水无法洗去，这种果冻状的物质在有机相中分配系数更大，有机层用无水硫酸钠干燥后旋蒸干，会有皂状的残留物。

如果实验室没有避光的条件，在日光下，进行前处理，对β胡萝卜素的分析影响真的很大吗？

总结问题： 1、正相色谱法分析时间如此快捷，为什么大家都不用？
2、有机层中会有果冻状残留物质，水无法洗涤去掉，所谓的水洗真的管用吗？
3、β胡萝卜素真的很不稳定吗？

各位有相关方面经验的专家，希望能指点迷津！

分
该帖子已被版主-boboenid007加2积分，加2经验;加分理由:长知识！

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老多_小多

第1楼2011/05/26

考虑的估计是跟杂质的分离问题，正相估计没反相好

0

色色猪

第2楼2011/05/26

水洗主要是洗掉有机溶剂里面的碱，偶尔会出现乳化现象，加强电解质或者甲（乙）醇都可以使之分离。
其实用反向做胡萝卜素出峰时间也没有30分钟那么长啊，用2.0ml/min流速，纯乙腈，柱子为15cm的安捷伦C18柱，柱温40摄氏度，出峰时间大概在16min左右。还算可以接受啦

0

梦难求

第3楼2011/05/27

用甲醇速度应该更快一点吧？只是柱压会更高一些。β胡萝卜素在一些溶剂体系里感觉稳定性很差。
色色猪(huangqining) 发表:水洗主要是洗掉有机溶剂里面的碱，偶尔会出现乳化现象，加强电解质或者甲（乙）醇都可以使之分离。
其实用反向做胡萝卜素出峰时间也没有30分钟那么长啊，用2.0ml/min流速，纯乙腈，柱子为15cm的安捷伦C18柱，柱温40摄氏度，出峰时间大概在16min左右。还算可以接受啦

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梦难求

第4楼2011/05/27

嗯，正相只是不利于异构体分离，杂质基本上没什么的。
老多_小多(emoc98311) 发表:考虑的估计是跟杂质的分离问题，正相估计没反相好

0

c02405

第5楼2011/05/28

建议采用C-8柱用纯甲醇做流动相,结果还不错

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