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【求助】HPLC 检测样品出峰问题，怎么解决才好？？

zhts0816

2011/05/30

液相色谱（LC）

分不开的峰！
本人现在在用HPLC-ECD检测6-OHDA。
文献流动相是：25mM柠檬酸，125mM磷酸钠（文献中写的是sodium phosphate），100mg/lEDTA，30mg/lSOS，配置好后用磷酸调节pH至2.5。
在我的实际操作中，先后试过pH=3.0, 3.5, 3.8, 4.1。出峰时间基本在4-6分之间（其中pH3.8出峰时间相对最好，在5-6分之间，而且出峰时间随着时间的进行一点一点往后移，这也是我很纠结的地方，怀疑是我操作问题，但找不到原因），但是我们测实际脑样品时，出现了一个大峰，时间从2分持续到5分（有拖尾现象），这样就影响到了6-OHDA，我们无法判断到底是不是6-OHDA。

后来我改了流动相：125mM柠檬酸（原来是25mM），125mM磷酸钠（文献中写的是sodium phosphate），100mg/lEDTA，30mg/lSOS，配置好后用磷酸调节pH至3.5。我检测了只有6-OHDA的样品，很奇怪，在 4-5分出了一个峰，11-12分出了一个峰，4针都是这样。然后我进了添加了6-ohda的脑样本，之前说的大峰倒是没有了，但是变成一个一个小峰（2-6分之间），而且11-12分的6-OHDA也没有出现，还是无法判断6-OHDA.
我很迷茫现在，我不知道我应该如何改进方法。
请各位大侠帮忙

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wanghongmei1123

第1楼2011/06/02

很有可能是你的仪器没有稳定好，建议你多开机稳定一段时间

0

1818

第2楼2011/06/02

个人认为是条件没有达到最佳!!改善改善条件

0

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