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【求助】MODLI-TOF MS测分子量

生物质谱

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  • 最近做MODLI-TOF MS测分子量,我的目的蛋白分子量是7.4KD,可是打出来的图谱没有符合的,小了将近2KD。克隆的蛋白基因测过序,应该没有问题。有没有可能是质谱不对,还是其它地方有问题。求帮助!
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  • maldiguy

    第1楼2011/06/23

    我个人觉得仪器的问题的可能性比较小
    应该是在分离提纯中出了问题,你要的东西可能没提纯出来

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  • goldendays

    第2楼2011/06/24

    你用标准品做过对照没?MALDI TOF要记得及时校验的。校验不及时,得到的结果会很意外的

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  • hwd6218554

    第3楼2011/08/15

    即使没有标准品校准,在1万以下的范围,MALDI也不会有2000Da的差距的,你看看在样品获得过程中是否出问题,你先可通过别的方法验证是否获得你表达蛋白,再做分子量测试。

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  • liufeilzu

    第4楼2011/08/22

    跑个page胶,不过2kda 的分子量差别有点小,调整TOF的激光能量试试

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  • daoyuanli

    第5楼2011/09/02

    应该是样品的原因吧。
    你的蛋白有没经过纯化?
    怎么会有这么多杂峰啊
    MALDI-TOF的峰一般是带一个单位的电荷,但有时也会有带两个单位电荷的,这样7.4k,有可能在3700左右会有峰。
    下面这个图是我以前做过的BSA的MALDI-TOF检测图谱,几个峰都是BSA的,只不过是因为带的电荷不同罢了。

    不过这个MALDI-TOF的分辨率也太差了吧?
    什么公司?什么型号的?

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  • daoyuanli

    第6楼2011/09/03

    我们用得ABI的4800
    在8000Da以下,误差在20ppm以内,有时仪器状态好的话可以做到10ppm以内,也就是说如果目标分子的分子量为8000Da,其误差应该是在0.08Da以内。
    而在20000-200000Da,误差一般在100Da以内,有时也会达到200Da,不过这个时候仪器给的分子量其实是一个平均分子量,这个时候仪器的分辨率下降,同位素峰分不开,就像上面的BSA,给的分子量是66442.9375Da,其实只是一个平均分子量,并不是一个精确的分子量。

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