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【求助】液相检测氨基酸-组氨酸和甘氨酸分不开

液相色谱(LC)

  • 最近做氨基酸检测,用OPA-MPA衍生后,液相色谱荧光检测,c18的柱子
    其他氨基酸都分得挺好,就是组氨酸和甘氨酸完全分不开,就看到一篇中文文献里也是这个情况。
    我估摸着是哪个细小环节没处理好,有经验的大虾指点下
    缓冲盐试过磷酸盐和乙酸盐的,各自都加了四氢呋喃,乙腈,以及3乙胺等试过,走梯度,都是一样的,2个分不开。
    附图,大家看看,红圈的地方就是甘氨酸和组氨酸的出峰时间
    谢谢
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  • 老多_小多

    第1楼2011/06/25

    你可以先用用仪器公司的条件试试

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  • zhangdp

    第2楼2011/06/25

    仪器公司的条件基本都用他们的柱子,比方安捷伦的AAA柱,我这没有,只有c18的柱子。我用的方法基本都是各个文献上的条件,哎,差距咋就这么大呢
    他们组氨酸都是跟在丝氨酸后面出来,和丝氨酸比较靠近,我的就和甘氨酸靠近哩

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  • zhangdp

    第3楼2011/06/25

    文献上也挺多c18柱子的。
    现在去试试看氨基酸标样(单标,固体)用0.2M盐酸溶解后再去衍生化进样看看
    明天来看结果

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  • zhangdp

    第4楼2011/06/26

    解决了,原来那柱子可能柱效不行了,换了根新柱子,改了梯度,能完全分开了,先甘后组

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