新手大肠杆菌阳性实验自白

应助达人

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3接种

3.1将培养好的大肠杆菌平板接种划线到伊红美蓝琼脂平板（EMB），培养24h。



3.2检查平板上有无黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落，菌量太多分不清典型菌落了，成了一条黑线。



3.3将伊红美蓝平板再接种划线到试管营养琼脂斜面，培养24h。



4生化实验及革兰氏染色

4.1革兰氏染色

4.1.1染色液准备，从右到左分别是：结晶紫染色液 革兰氏碘液 95﹪乙醇 沙黄复染液。



4.1.2染色过程：

1.取一滴无菌食盐水于载玻片上，用接种环转移菌种于食盐水中并均匀涂布于载玻片上，使其有一定形状，如圆形或方形。自然晾干，或烤干，温度不宜过高，不烫手为宜，最后将涂片在火焰上固定。

2.滴加结晶紫染色液，染色1min，用柔水冲洗。

3.滴加革兰氏碘液，染色1min，用柔水冲洗。

4.滴加95﹪乙醇脱色，脱色要适中，以脱掉颜色即可，过轻假阳性，过重假阴性。

5.滴加复染液，复染1min。水洗晾干，镜检。





4.1.3显微镜检验

先用低倍镜观察，看到的很清晰但成片，再用高倍镜观察，看到的是每个菌株，但不典型，再用油镜观察，菌种形状很典型。红色杆状的菌株。显微镜不能拍片，很遗憾。



4.2生化实验

4.2.1药品准备及接种

从右到左分别是，色氨酸肉汤 MR-VP 西蒙氏枸橼酸盐。分别用接种环接种到以上药品中，培养箱培养24h。



4.2.2结果观察

培养24h后生化实验



色氨酸肉汤滴加2滴靛基质试剂出现红色环显阳性。



VP：按6：2的比例依次滴加VP甲液乙液30min后，颜色没变化，仍显黄色呈阴性。

MR：48h后滴加甲基红，颜色显红色，呈阳性


西蒙氏枸橼酸盐培养96h颜色仍未变色显深绿色，呈阴性。



4.3结果

从微生物显微镜检测以及生化鉴定，都充分证实是典型的大肠杆菌。每一步骤的变化，都具有大肠杆菌的典型特征，由此可见，检验过程的操作还是比较成功的。

5.结论

大肠杆菌阳性实验，虽然不是什么有难度的实验，但对于新人来说是很有必要的，对于从来没有做到（真）菌的试验者也是很有必要的，此次实验虽然没有什么新的创意和变化，但详细展现了实验的整个操作过程，给没有做过阳性对照实验的操作者一个借鉴。

新手操作有不规范或错误的地方，请各位专家及时批评指正，拜谢。

嗯。图文并茂的好原创！原创其实很简单吗，楼主继续～哈哈

划线菌落分的不是很开啊~~~
嘿嘿，染色我一般就直接用烤了，木有尝试过晾干，楼主两种都尝试过吗？观察效果有影响吗？

支持楼主，原创不在技术有都么高，重在用心与实际操作。

新手能做到这样，就很好了，能够做阳性试验就很幸福。

接种菌时带乳胶手套，到涂片染色时为什么就不带乳胶手套了呢？要养成良好的工作习惯，特别是分离阳性菌时更加需要注意。

薄荷草说的轻松，今年原创我自身感觉不如去年，不知道什么原因。