薄层色谱和气相色谱在样品前处理的方法分别是什么？（食品中防腐剂苯甲酸和山梨酸的测定）

三个石头

2011/09/16

私聊

前处理综合讨论

第一法　薄层色谱法
1　原理
　　样品酸化后,用乙醚提取山梨酸、苯甲酸。将样品提取液浓缩,点于聚酰胺薄层板上,
展开。显色后,根据薄层板上山梨酸、苯甲酸的比移值,与标准比较定性,并可进行概略
定量。
2　试剂
2.1　异丙醇。
2.2　正丁醇。　　
2.3　石油醚：沸程：30～60℃。
2.4　乙醚: 不含过氧化物。
2.5　氨水。
2.6 6N盐酸: 取100mL盐酸,加水稀释至200mL。
2.7　无水乙醇。
2.8　聚酰胺粉：200目。
2.9　山梨酸标准溶液：精密称取0.2000g山梨酸,用少量乙醇溶解后移入100ml容量瓶中
并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于2mg山梨酸。
2.10　苯甲酸标准溶液:精密称取0.2000g苯甲酸,用少量乙醇溶解后移入100ml容量瓶中,
并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于2mg苯甲酸。
2.11　展开剂
2.11.1 正丁醇-氨水-无水乙醇(7：1：2)。
2.11.2 异丙醇-氨水-无水乙醇(7：1：2)。
2.12 显色剂：0.04％溴甲酚紫的50％乙醇溶液,用0.1N氢氧化钠溶液调至pH=8。
2.13 4％氯化钠酸性溶液：于4％氯化钠溶液中加少量6N盐酸酸化。
3 仪器
3.1 吹风机。
3.2 层析缸。
3.3　玻璃板：10×18cm。
3.4　微量注射器：10μL,100μL。
3.5　喷雾器。
4　操作方法
4.1　样品提取:
　　称取2.5g事先混合均匀的样品,置于25ml带塞量筒中,加0.5ml 6N盐酸酸化,用15、
10ml乙醚提取两次,每次振摇1min,将上层醚提取液吸入另一个25ml带塞量筒中,合并乙
醚提取液。用3ml4％氯化钠酸性溶液洗涤两次,静止15min,用滴管将乙醚层通过无水硫
酸钠滤入25ml容量瓶中。加乙醚至刻度,混匀。吸取10.0ml乙醚提取液分两次置于10ml带
塞离心管中,在约40℃的水浴上挥干,　加入0.10ml乙醇溶解残渣,备用。
4.2　测定
4.2.1　聚酰胺粉板的制备：称取1.6g聚酰胺粉,加0.4g可溶性淀粉,加约15ml水,研磨
3～5min,立即倒入涂布器内制成10×18cm、厚度0.3mm的薄层板两块,于室温干燥后,于
80℃干燥1h,取出,置于干燥器中保存。
4.2.2　点样：在薄层板下端2cm的基线上,用微量注射器点1μL、2μl样品液,同时各点
1μl、2μl山梨酸、苯甲酸标准溶液。
4.2.3　展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂(2.11.1或2.11.2)的展开槽
内,展开槽周围贴有滤纸,待溶剂前沿上展至10cm,取出挥干,喷显色剂,斑点成黄色,
背景为蓝色。样品中所含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量(山梨酸、苯甲酸的比
移值依次为0.82,0.73)。
4.2.4　计算：
A1 × 1000
X1 = ─────────────..........(1)
m1 × 10/25 ×V2/V1×1000
式中：X1—─样品中山梨酸(苯甲酸)的含量,g/kg;
　　　A1—─测定用样品液中山梨酸(苯甲酸)的含量,mg;
　　　m1——样品质量,g;
　　　V1——加入乙醇的体积,mL;
　　　V2──测定时点样的体积,mL;
　　　10——测定时吸取乙醚提取液的体积,mL;
　　　25——样品乙醚提取液总体积,mL。
　　　注：本方法还可以同时测定果酱、果汁中的糖精。

　　　　　　　　　　　　　　第二法　气相色谱法

5　原理　　　　
　　样品酸化后,山梨酸、苯甲酸用乙醚提取浓缩后,用附氢火焰离子化检测器的气相色
谱仪进行分离测定,与标准系列比较定量。
6　试剂
6.1　乙醚。
6.2　石油醚：沸程30～60℃。
6.3　盐酸。
6.4　无水硫酸钠。
6.5　山梨酸、苯甲酸标准溶液: 精密称取山梨酸、苯甲酸各0.2000g,置于100ml容量瓶
中,用石油醚-乙醚(3：1)混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于2mg山梨
酸或苯甲酸。
6.6　山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液,以石油醚-乙醚
(3：1)混合溶剂稀释至每毫升相当于50、100、150、200、25Oμg山梨酸或苯甲酸。
7　仪器
　　气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器。
8　操作方法
8.1　样品提取
　　按4.1自“称取2.5g”至“加乙醚至刻度”依法操作。准确吸取5mL乙醚提取液于5mL
带塞刻度试管中,置40℃水浴上挥干,加入2ml石油醚-乙醚(3：1)混合溶剂溶解残渣,备
用。
8.2　色谱条件
8.2.1　色谱柱：玻璃柱,内径3mm,长2m,内装涂以5%DEGS+1%H3PO4固定液的60～80目
Chromosorb W AW。
8.2.2　气流速度: 载气,氮气,50ml/min(氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择
各自的最佳比例条件。)
8.2.3　温度：进样口 230℃;检测器230℃;柱温170℃。
8.3　测定
　　进样2μL标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中,可测得不同浓度山梨酸,苯
甲酸的峰高,以浓度为横坐标,相应的峰高值为纵坐标,绘制标准曲线。同时进样2μL样
品溶液,测得峰高与标准曲线比较定量。
8.4　计算
A3 × 1000
X2 = ─────────────..................(2)
m2×5/25×V4/V3×1000
式中：X2──样品中山梨酸或苯甲酸的含量,g/kg;
　　　A3——测定用样品液中山梨酸或苯甲酸的含量,μg;
　　　V3——加入石油醚—乙醚(3：1)混合溶剂的体积,mL；
　　　V4─—测定时进样的体积,μL；
　　　m2──样品的质量,g;
　　　 5─—测定时吸取乙醚提取液的体积,mL;
　　　25──样品乙醚提取液的总体积,mL。
　　由测得苯甲酸的量乘以1.18,即为样品中苯甲酸钠的含量。

2.山梨酸、苯甲酸的气相色谱测定原理：
样品经酸化后，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用带氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，然后与标准系列进行比较定量。
仪器和试剂：
（1）乙醚、石油醚：沸程30～60 ℃
（2）山梨酸、苯甲酸标准溶液：用石油醚-乙醚（3：1）混合溶剂配制溶液每毫升相当2mg山梨酸或苯甲酸。
（3）山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油醚-乙醚（3：1）混合溶剂稀释至每毫升相当于50、100、150、200、250µg山梨酸或苯甲酸。
（4）仪器：气相色谱仪，带氢火焰离子化检测器
操作步骤
(1)样品的处理：称取2.5g事先混合均匀的样品，置于 25mL带塞试管中，加0.5mL 6mol／L HCI酸化，用15、10mL乙醚提取2 次，每次振摇1min，将上层醚提取液吸入另一个25mL一带塞试管中，合并乙醚提取液。用 3mL 4％氯化钠酸性溶液洗涤2次，静置15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取5mL乙醚提取液于5mL 带塞刻度试管中，置40℃水浴上挥干，加入2mL石油醚-乙醚（3：1）混合溶液溶解残渣，备用。
(2)色谱参考条件
色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长2m，
气流速度：载气、氮气，50mL／min（氮气和空气、
氢气比按各仪器型号不同选择各自的最
佳比例条件）。
温度：进样口 230 ℃ ，检测器230 ℃ ，柱温170 ℃ 。
（3）测定：
进样2µL标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰面积，以浓度为横坐标，相应峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。同时进样2µL样品溶液，测得峰面积可从标准曲线相应的山梨酸、苯甲酸的浓度。

结果计算

式中：
X——样品中山梨酸或苯甲酸的含量，g／kg；
ρ ——标准曲线上查得山梨酸或苯甲酸的量，μg/mL；
V1——加入石油醚-乙醚(3+1)混合溶剂的体积，mL：
m——样品的质量，g；
5——测定时吸取乙醚提取液的体积，mL；
25——样品乙醚提取液的总体积，mL。

说明及注意事项：
1、由测得苯甲酸的量乘以相对分子质量比1.18，即为样品中苯甲酸钠含量。
2、由测得山梨酸的量乘以相对分子质量比1.34，即为样品中山梨钾的含量。
3、通过无水硫酸钠层过滤后的乙醚提取液应达到去除水分的目的，否则5mL乙醚提取液在40 ℃挥去乙醚后仍残留少量水分会影响l测定结果，这时必须将残留水分挥干，但会析出极少量白色氯化钠，当出现此情况时应搅松残留的无机盐后加入石油醚-乙醚（3：1）振摇，取上清液进样，否则氯化钠覆盖了部分山梨酸、苯甲酸，使定结果偏低。

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