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液质系统双酚A(BPA)空白干扰峰的解决方案

  • 小猪飞飞
    2011/12/21
  • 私聊

液质联用(LCMS)



  • 今年的原创大赛已经接近尾声,还记得是开始的时候写过一篇,现在再来搭个末班车。近日接到一个项目,是要做水中的双酚ABPA)。

    之前我做过双酚A的测定,是在生物样本中BPA的检测,用的也是液质。也考察过实验室塑料器材所带入的空白本底。但正如大家所知的,液质的基质效应仍旧是不能避免的问题,因此,空白中的干扰往往会被掩盖掉,因此也没有特别注意其本底。再加上之前的项目主要分析的是其他几个物质,没有考察BPA,因此,不太清楚仪器之前的BPA的残留情况。

    一接到这个项目,先用标准品跑了一下。我所用的质谱配备了两台液相12001290。先用的1290,常规的耐高压的C18色谱柱,用之前做生物样本时的流动相洗脱程序,从90%的水快速过渡到高有机相,结果发现在BPA的出峰位置上,有响应很高的峰。考虑可能是之前做生物样本时的残留,重复进样后发现仍旧有干扰峰,响应也很稳定。如图:



    考虑过是否是塑料或者试剂中存在的干扰,于是将枪头浸泡、试剂空白进样等,没有发现明显的峰响应的改变。于是将1290进样针座、六通阀定子、转子等拆下,超声清洗,之前发帖,有版友还提到是柱子的问题,此次用的是新色谱柱,应该可以排除。但清洗各零部件之后,发现空白干扰依然存在,且响应较清洗之前要高5倍左右。与安捷伦工程师沟通后,建议继续清洗,实在不行的话再请工程师上门或者用其他有机溶剂清洗整个仪器管路(二氯甲烷、丙酮等,对金属有一定的腐蚀作用)。清洗之后响应还上升了不少:



    再次清洗1290六通阀、针座,效果仍旧不明显。工程师建议可以让液相反复进样,让六通阀反复切换,以此清洗六通阀部件。结果同上。此时已经折腾了两天。



    在无望的情况下,只好将1200派上。换上数据转接线,开启1200。也是用类似梯度的洗脱程序。喜人的结果出现了,1200竟然是零残留!




    用该洗脱程序让1200反复进样,发现空白的确没有残留。内心的欣喜油然而生。于是开始配制低浓度的BPA标准溶液,12ppb。重复进了几针,算峰面积,发现没有倍数关系,两者响应相当!看到这个结果后我有点不祥的预感,于是进了一阵空白溶液,果不其然,空白中也有了干扰峰,在反复进几针后,发现响应慢慢再变高。奇怪了,1200怎么也有了BPA的干扰峰?



    无奈之下,只好向一位同仁MM请教,经过沟通后,原来她也遇到过类似的问题。一开始做BPA时,没有干扰,但做了一小段时间后,BPA的干扰就出现了,而且还会相当高。她用的waters的机子,与waters的工程师沟通后,工程师说某客户也遇到过,建议走等度洗脱。

    于是赶紧采用该建议,在1200上用70:30的乙腈水走等度,短暂的等待后,发现一切又恢复正常,干扰峰不见了,而且响应也很好。后来还是在1290上完成了该项目的分析,毕竟时间还是要短不少。因为此次的项目是水中的BPA测定,因此基质效应较小、且只要分析这一个目标物,用等度洗脱应该不会存在太大问题。但如果要将基质与BPA分开、或者同时要兼顾其他物质呢?后面将继续考察。以下是1290等度洗脱的图谱:

    配制2ng/ml,进样5微升,图谱如下:



    同时了解到,国内另一位专家做BPA时采用的方法,即在流动相后、六通阀前,再加一根同样性质的色谱柱,就可以将系统中的BPA与样品的BPA分开。当然系统要承受得了两根色谱柱所带来的系统压力。之前发帖求助中,也已经有版友提到了这个方法。



    空白问题在样品分析中也是比较普遍的问题,如果是系统中的空白,更是让人头疼。
    经历了短暂的、纠结的空白峰干扰问题,也在较短时间内完成了项目。理论上干扰峰应该是系统中的
    BPA。但不太清楚BPA的出峰其实很快,如果100%的乙腈可以将其洗脱出来,70%的乙腈应该也可以。为什么70%的乙腈就不会出现干扰峰?欢迎版友继续分享经验!
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  • 七宝

    第1楼2011/12/21

    有没有比对过HPLC于LC-MS的测试数据?好像我这边测试HPLC的数据偏大

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  • 小猪飞飞

    第2楼2011/12/21

    HPLC的数据还真没比过。我后面有时间再坐下。但从我现在的结果来看,同样浓度的样品进1200和1290(都接MS),同样的进样量和流动相比例,响应要差不少,1290高于1200。但这个应该不影响定量结果。

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  • 胜邪

    第3楼2011/12/21

    考虑一下高压流动相对管路内壁的冲蚀,如果有条件,把PEEK管路换成不锈钢管路试试。
    比较一下同一个标液70%乙腈,80%,90%,95%等度时,BPA的信号响应情况,和出峰时间提前情况....

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  • 小猪飞飞

    第4楼2011/12/21

    peek换不锈钢的还是有点难度的,尤其是流动相那块。高有机相比例的没试,也考虑到保留时间太短的问题。低有机相试过的,峰形会慢慢变宽,下礼拜做样品时再试下

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  • happy爱米粒

    第5楼2011/12/21

    这个项目如果用气质做会不会不存在这样的问题?

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  • 小猪飞飞

    第6楼2011/12/21

    气质可能会好一些,后面也准备用气质做一下,不过要需要进行衍生化

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  • symmacros

    第7楼2012/01/07

    应助达人

    系统空白干扰确实有时候是个头疼之事,很烦人,检查和排除有时候很难。

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  • symmacros

    第8楼2012/01/07

    应助达人

    在流动相和六通阀之间安装相同的柱子来分离系统干扰也是办法,不知道有人试过没有?

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  • symmacros

    第9楼2012/01/07

    应助达人

    请问楼主是用什么流动相?

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  • 小猪飞飞

    第10楼2012/01/09

    我没试过,主要怕系统压力太大,所以先用了等度洗脱。如果要梯度的话,可能是要采用加一根柱子的方法。有同仁试过的,应该可行

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