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流式细胞术中使用Flowjo补偿自动调节功能自动化调节补偿【转帖】

生命科学仪器综合讨论

  • 早就听说flowjo的补偿自动调节功能,上网寻觅一圈都没有找到相应教程,实在忍不了了,就自己在此写个教程,希望能帮助到其他同学,废话不多。上教程,如果大家觉得不错,赏两个叮当,让我有更多的动力在为大家奉献一些小教程。

    1.样品制备,及数据采集

    我们实验室是BD公司的流式机,采集软件是cellqust pro,我的习惯都是采集数据以后,转用FLOWJO再继续分析,制图。样品制备同常。

    下面以脾淋巴细胞CD4,CD8分群来做一简单介绍。

    数据采集中,仍然要使用阴性管调节 阈值 电压 ,圈定大概的淋巴细胞的门。完成后,收细胞,保存数据为none.001

    转cd4-pe的单阳样品,不用调节补偿,直接收细胞,保存数据为cd4-pe.002。

    同样,转cd8-fitc的单阳样品,不用调节补偿,直接收细胞,保存数据为cd8-fitc.003

    最后上样品和control组,收细胞,保存数据为sample.004,如果有control组,假设为control.005

    (以上处理跟常规处理的主要区别,就是补偿调节都是0%,即不调节补偿,省去了补偿调节这一步,收细胞的速度是不是快了不是一点两点咧.)

    2,自动补偿调节

    将数据导入flowjo,本人用的是win环境下的lfowjo7.6.2xx版,有同学反应,文件不能导入或者导入细胞数是0,同学们可以试试将数据文件夹放在全英文路径下,同时有的从MAC系统拷来的目录,可以试着对文件夹从命名一下,也要是全英文,可能可以解决文件打不开的问题。

    将以上文件全部拖拽进flowjo,使用NONE.001圈定淋巴细胞门LYM.将门拖拽到allsample让门应用到所有样本上。

    这时候我们可以先看看sample.004的散点图,因为没有调节补偿,根本不是我们所能使用的图,更化不了象限,所以,我们开始调节补偿。
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  • 老好人

    第1楼2011/12/26


    选择windows,open compensation editor,在界面 中,有提示 drag compensation control here,我们把cd4-pe.002,cd8-fitc.003,none.001,3组依次拖放过去。把需要调节补偿的sample.004和假设的control.005拖放到左边的sample栏里去。点击finish,点击最下方的 all sample 选择 set allsample。

    再打开sample的LYM门下的FL1,FL2散点图看一下吧。

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  • 老好人

    第2楼2011/12/26

    我们回到补偿编辑面板看一下,他在处理过程中,自动生成了,补偿数据,也就是我们应该在收细胞前,调整的补偿数据。但这个样品是学生练手的样品,在制备样品弃上清的时候,他把一个单阳的细胞团给吸走了,所以,细胞数差异太大,FL1-FL2偏差到了37%,在手动调节的时候,也是这个样子。

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  • 小水爱小优

    第3楼2013/10/17

    谢谢你很有用

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  • 小水爱小优

    第4楼2013/10/17

    请问一下你们做的是几色的流式

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  • 李小叶

    第5楼2013/11/07

    BD个人型流式细胞仪Accuri C6-北京赛泰克生物科技有限公司

    BD Accuri C6是一款真正意义的个人型流式细胞仪,它让流式细胞技术的应用更加方便,让日常维护更容易被广泛接受,使购置成本更为低廉,从而使得流式技术不再只是少数实验室的高端研究工具。与传统型号相比,Accuri C6具有以下几个典型特点:
    1、    跨越7个数量级超宽动态范围的检测器,轻松实现免调电压操作;
    2、    经典的双激光(488nm和640nm)四荧光通道(四个荧光检测器,以检测例如:FITC、PE、PerCP和APC等常规荧光染料)配置;
    3、    根据样品进样体积,可进行绝对计数或计算每微升样本的实际浓度;
    4、兼容广泛的上样类型,96孔板,48孔板,EP管,12*25mm管等
    5、可使用0.22um过滤的去离子水作鞘液,大大降低耗材成本
    6、体积小巧,移动方便,性价比高
    流式细胞术在食品微生物学中的应用主要包括:细菌活性及细胞数快速检测、食品中腐败菌及病原微生物污染的检测;在食品发酵工艺中的应用主要包括:乳酪生产过程中发酵菌自溶的检测、发酵菌株在发酵过程中的活性检测(死活、细胞周期、胞内PH值、胞内糖原及蛋白酶活性等)、检测益生菌产品长期存储后益生菌的内源特性、检测益生菌的耐受能力等。
    我公司为BD授权经销商
    北京赛泰克生物科技有限公司-科学仪器事业部
    公司地址:北京市海淀区学院路甲5号768创意产业园
    联系电话:010-61199172、61199089、61199156、61199329

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