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关于样品在buffer里的形态问题的困扰

毛细管电泳(CE)

  • 大家都知道,如果分析物HAc是弱酸,则当bufferpH的时候,分析物的存在形式是HAc;pH=pKa时,则HAcAc-同时存在;pH>pKa时,以Ac-形式存在。



    我目前同时分离20种东西,其中有几种种分析物的pKa正好等于或接近于buffer的pH,所以我怀疑我目前得到的谱图中会有几对峰是分别属于这几种分析物的(也就是一种样有两个峰)。同时,有可能有些样的另外一种形态的峰跟其他物质的峰重叠在一起没有分开。有没有人遇到过这样的情况?如何解决?
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  • nini2006

    第1楼2012/02/01

    木有银关注?自己顶~~~~~

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  • nini2006

    第2楼2012/02/02

    置顶?惶恐惶恐~

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  • nini2006

    第3楼2012/02/02

    据说,这样的分析物在buffer里面同时存在解离和结合的热力学、动力学的动态过程,当结合速率大于解离速率时,其实是只能得到一个峰。当然,我可以自己验证一下。有人同意吗?进来来讨论讨论撒~

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  • ericwong

    第4楼2012/02/03

    毛细管电泳中一个重要的问题就是buffer的选择,期待有一种buffer可以分开所有的成分几乎是不可能的。在成分很多的情况下,有的成分没有分开是非常正常的。
    选择buffer的一个因素就是调节它的pH值。当然在不同pH值的情况下,同一个样品中的成分是有可能发生变化的。

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  • cpudaxiao

    第5楼2012/02/05

    你这样选择和PKA 接近的PH犯了很大的忌讳,很容易出现你说的现象。两个方法,1,选择一个PH,要大于或小于所有的PKA两个单位,这样保证样品以一种离子态存在,2,引入其他分离因素,比如胶束,比如手性拆分剂,比如有机改性剂等。

    nini2006(nini2006) 发表:大家都知道,如果分析物HAc是弱酸,则当bufferpH的时候,分析物的存在形式是HAc;pH=pKa时,则HAcAc-同时存在;pH>pKa时,以Ac-形式存在。



    我目前同时分离20种东西,其中有几种种分析物的pKa正好等于或接近于buffer的pH,所以我怀疑我目前得到的谱图中会有几对峰是分别属于这几种分析物的(也就是一种样有两个峰)。同时,有可能有些样的另外一种形态的峰跟其他物质的峰重叠在一起没有分开。有没有人遇到过这样的情况?如何解决?

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  • nini2006

    第6楼2012/02/06

    我现在用的就是胶束电泳,选则个pH实在是不得已而为之,因为分离的东西多,pKa范围拉得很大。
    实验证明,在这个pH值下,一个分析物的几种形态是同时存在的,因为跟空白对比,单个分析物确实出现了几个峰,只是一个主峰,其他两个峰非常的小。

    cpudaxiao(cpudaxiao) 发表:你这样选择和PKA 接近的PH犯了很大的忌讳,很容易出现你说的现象。两个方法,1,选择一个PH,要大于或小于所有的PKA两个单位,这样保证样品以一种离子态存在,2,引入其他分离因素,比如胶束,比如手性拆分剂,比如有机改性剂等。

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  • cpudaxiao

    第7楼2012/02/07

    胶束电泳我做过,它的前提是只有分子态的才可以进入胶束,离子态的不可以。并且胶束不同数量的其他分子,对总的结合物影响不同。即一个胶束结合10个分子和100个分子后形成的复合物是不同的,达到一定数量后就会出两个峰,同理也会出许多峰。出现这种情况,可以适当降低胶束的使用浓度,或增加样品使用量,目的就是达到胶束和样品分子形成复合物的均一性。大家可以继续交流,邮箱:zgj_0443712@yeah.net,必要的时候可以贴图上来,大家好分析!

    nini2006(nini2006) 发表:我现在用的就是胶束电泳,选则个pH实在是不得已而为之,因为分离的东西多,pKa范围拉得很大。
    实验证明,在这个pH值下,一个分析物的几种形态是同时存在的,因为跟空白对比,单个分析物确实出现了几个峰,只是一个主峰,其他两个峰非常的小。

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  • nini2006

    第8楼2012/02/10

    受教了,非常感谢~

    cpudaxiao(cpudaxiao) 发表:胶束电泳我做过,它的前提是只有分子态的才可以进入胶束,离子态的不可以。并且胶束不同数量的其他分子,对总的结合物影响不同。即一个胶束结合10个分子和100个分子后形成的复合物是不同的,达到一定数量后就会出两个峰,同理也会出许多峰。出现这种情况,可以适当降低胶束的使用浓度,或增加样品使用量,目的就是达到胶束和样品分子形成复合物的均一性。大家可以继续交流,邮箱:zgj_0443712@yeah.net,必要的时候可以贴图上来,大家好分析!

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  • nini2006

    第9楼2012/02/17

    MECC的前提是“只有分子态的才可以进入胶束”?这点我不太认同,SDS是最常用的胶束物质,很多事实都证明,它在离子态物质的分离中显示出了强大的分离能力。如果离子态物质进入不了SDS形成的胶束相,那这个分离能力如何体现?

    cpudaxiao(cpudaxiao) 发表:胶束电泳我做过,它的前提是只有分子态的才可以进入胶束,离子态的不可以。并且胶束不同数量的其他分子,对总的结合物影响不同。即一个胶束结合10个分子和100个分子后形成的复合物是不同的,达到一定数量后就会出两个峰,同理也会出许多峰。出现这种情况,可以适当降低胶束的使用浓度,或增加样品使用量,目的就是达到胶束和样品分子形成复合物的均一性。大家可以继续交流,邮箱:zgj_0443712@yeah.net,必要的时候可以贴图上来,大家好分析!

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  • cpudaxiao

    第10楼2012/02/19

    体现在峰型的好转,比如改善了拖尾等。SDS本身是表面活性剂,可以改变缓冲溶液的理化性质,如黏度等,这些因素的改变会引起电流的变化,PH的变化,样品成分在两相间分配的改变等。

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