省部重点实验室
第1楼2012/03/02
图2:(a)FANCF MS-HRM测定,显示稀释卵巢癌细胞株2008中存在DNA甲基化。(b)MGMT MS-HRM测定,显示乳腺癌细胞株MDA-MB435和HS578T中存在甲基化。
结果和讨论
针对两个基因的MS-HRM测定法都可检出非甲基化DNA背景下1%的甲基化DNA。图1显示MGMT的测定和FANCF测定相比,在该试验使用的引物退火温度(58℃)条件下可更加明确的识别稀释比更低的甲基化标准品。图2显示使用FANCF和MGMT MS-HRM测定法筛查多种细胞株的甲基化状态。图2a显示通过FANCF筛查的九种细胞株中只有卵巢癌细胞株2008存在甲基化,其样本熔解特征曲线与100%的甲基化质控品相似。研究的其它细胞株通过FANCF检测为非甲基化结果。图2b显示通过MGMT检测出乳腺癌细胞株MDA-MB435存在甲基化。该样本的曲线特征再次与100%的甲基化质控品相似。HS578T乳腺癌细胞株非常有趣,因为它的熔解曲线与非甲基化和甲基化曲线都不同。该曲线以检测区出现异质性甲基化为特征。
LightCycler® 480实时荧光PCR仪是一款非常适合进行HRM的实时荧光PCR仪器,配合使用LightCycler® 480高分辨熔解扩增试剂盒,即成为了一套执行甲基化敏感性高分辨熔解分析(MS-HRM)检测的可靠平台,允许快速高通量研究DNA甲基化。相信这个新的研究方法的推出可以有效加快表观遗传学的研究进程,做到更快、更准、更好。
参考文献
1. Bird AP (1986) Nature 321: 209–213
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