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如何科学做好样品安排及原始记录填写
栀子花开
2020/06/01
解密双螺旋团队
私聊
PCR
如何科学做好样品安排及原始记录填写
0
前言
如何科学做好检测样品安排及原始记录填写,做到既方便实验操作,又符合计量认证、兽医实验室考核等的要求,是一个值得探索和讨论的问题。以下内容围绕上述要求展开,如无需求请自行忽略。
1
合理安排检测样品
1.1
血凝抑制试验
操作:一批样品可以占用一块板或多块板,但不建议多批样品共用一块板;建议阳性对照、阴性对照单独用一块板。
实例:
1
批禽血清
30
份,建议占用
4
块板,最后一块板的最后
2
行空着。
理由:每批样品均需填写原始记录,如果多批样品共用一块板,在填写原始记录时势必有重叠部分。如果一批样品单独占用一块板或多块板,不和其他样品共用,在处理和阅读原始记录时会更加清晰。同理,一次检测多批样品时,阳性对照、阴性对照是共用的,每批样品的原始记录上均需附上阳性对照、阴性对照的结果。这些对照单独占用一块板,会使原始记录的处理和阅读更加清晰。
1.2 ELISA
试验
操作:一块板可以安排一批样品或多批样品,但不建议一批样品占用多块板(一批样品超过一块板的除外)。
实例:
5
批样品
100
份(每批
20
份),建议采用
2
块板,一块板安排
3
批样品
60
份
+
对照
4
份,占用
8
条;一块板安排
2
批样品
40
份
+
对照
4
份,占用
5.5
条。多余板条拆下或折断,并用同类型已使用且清洗干净的板条补上,并做好记号(一般在板条上标记
×
表示非实验板条)。
理由:同上。
1.3
荧光定量
PCR
试验
操作:一块板可以安排一批样品或多批样品,但不建议一批样品占有用多块板;每批样品最好占用一条或多条
8
联管;待检样品与阳性对照最好能间隔数个孔位。
实例:两批样品
40
份(每批
20
份),建议采用
6
条
8
联管,第一批样品占用第
1
条、第
2
条及第
3
条前
4
孔;第二批样品占用第
4
条、第
5
条及第
6
条前
4
孔;阴性对照放在第
6
孔第
5
孔,阳性对照放在第
6
条最后一孔。
理由:处理和阅读原始记录时会更加清晰,且在一定程度上可以避免加样时的交叉污染。
2
做好完整的原始记录
2.1
血凝抑制试验
操作:建议对红细胞流淌后的结果进行拍照,并将图片打印后作为原始记录的附件,在手写部分只记录滴度。
理由:既记录最原始的数据(图片也是一种数据),又简化原始记录的手写强度。
部分计量认证评审专家认为,原始记录上应记录最原始的数据,对于血凝抑制试验来说,最原始的数据就是每一孔的凝集程度,也就是几个
“
+
”
。我们平时记录的滴度,是在观察每个孔的凝集程度后,综合判定得出的“结果”,是已经经过加工的,不是“原始数据”。对于这一点,很多接受计量认证评审的实验室都叫苦不迭,但评审专家的意见必须遵守。
根据评审准则的规定,原始数据不仅仅包括文字,也可以是图片、音频、视频等电子数据。因此我们可以根据这个规定,将结果用图片的方式进行固定,打印出来后附在手写原始记录后面作为附件,这样手写内容就可以简化为只表述最终滴度。
前面所讲的阳性对照、阴性对照单独占用一块板,道理就在这里。每批样品的图片,和阳性、阴性对照的图片,拼在一起打印出来,才是一份完整的检测“原始数据”。
2.2 ELISA
试验
操作:建议将酶标仪读取的数据打印出来后,附在原始记录手写内容后作为附件。读取的数据最好有固定的模板,且含有
S/P
值(或
S/N
值)和阴阳性判定结果。这样手写部分可只记录阴阳性判定结果。
理由:
(1)
原始记录应体现最原始的数据,以便重现检测过程。在
ELISA
试验中,最原始的数据是酶标仪读取的每一孔的
OD
值,而
S/P
值和阴阳性是经过数据处理后的结果而非最原始的数据。根据评审准则的规定,原始记录必须附上每一孔的
OD
值符合要求。
(2)
有的实验室在做
ELISA
原始记录时,但填写样品的
OD
值,而未填写
S/P
值。这样做是不严谨的,因为绝大多数
ELISA
结果,是根据样品
S/P
值是否大于某个数值或
S/N
值是否小于某个数值来判定的,原始记录只填写样品
OD
值,缺少了计算过程,存在瑕疵。
2.3
荧光定量
PCR
试验
操作:建议将荧光定量
PCR
工作站的检测报告(
REPORT
)打印出来后,附在原始记录手写内容后作为附件。这样手写部分可只记录阴阳性判定结果(阴性可简写为
ND
——
NotDetected
未检出,阳性直接填写
Ct
值)。
理由:基本同上。荧光定量
PCR
试验的原始数据并不是
Ct
值,而是每个循环延伸结束后读取的荧光信号强度。根据评审准则的规定,原始记录必须附上荧光信号强度图谱才符合要求。
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