仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

【实战宝典】核酸提取方式主要有哪些?有何差异?

  • 小官人-闭关修炼中
    2022/07/07
  • 私聊

PCR

  • 问题描述:核酸提取方式主要有哪些?有何差异?
    解答:

    目前主流的核酸提取方法有煮沸裂解法、苯酚氯仿抽提法、离心柱法、磁珠法,接下来介绍这几个方法的原理、优劣势及适用场景。

    1)煮沸裂解法:原理是通过加热使细胞膜破裂,充分暴露核酸,核酸可溶解于上层水溶液中,通过高速离心沉淀变性蛋白质和细胞碎片,上清液即为核酸粗提液。此方法的操作相对简单,成本低,但由于是粗提,成分比较复杂,有时可能带来一定的体系干扰或者裂解不充分的情况,一般用于细菌定性鉴定时使用。

    2)苯酚氯仿抽提法:原理是苯酚和氯仿抽提除去蛋白和多糖类杂质,获得相对较为纯净的基因组核酸。成本比较低廉。缺点是试剂毒性较大,长时间操作对人员健康有较大影响。试剂需要自行配制,批次间差异显著。提取效率相对较低,不适宜少量或者微量操作。一般用于大量核酸样本的抽提。

    3)离心柱法:原理是利用裂解液促使细胞破碎,使细胞中的核酸释放出来,利用柱子中的载体吸附提纯核酸。它的优点是比传统的酚氯法提取纯度高、毒性低,有利于RNA保护,而且能进行微量操作,价格较低。缺点是不便于高通量、自动化操作,对实验室设备和人员的操作技能要求较高。目前应用广泛,常用于细菌、病毒、动物组织等多种样本的核酸提取[13]

    4)磁珠法:与离心柱的操作原理基本相同,利用交换吸附材料吸附核酸,从而将核酸和蛋白质等细胞中其他物质分离。优点是能够实现自动化、高通量操作,配合核酸自动提取仪使用,操作简单、用时短,核酸纯度高、浓度大,可广泛用应用于血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的DNARNA分离,但超高通量样本同时进行时,可能存在一定的污染风险。



    以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...