超声波破碎细胞的常见问题

如果是基质菌丝的话,好可以考虑用溶菌酶处理一下.

一般来讲这几种方法读可以的:

一,液氮研磨

二,用french press破碎

三，超声波破碎

四，溶菌酶处理预处理

超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声对细胞的作用主要

有热效应，空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动，

使部分能量转化为局部高热（42－43℃）。空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和

其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温（约5000℃）、高压（可达

500×104Pa），可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应

可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介

质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相

关。

100g大肠杆菌溶于1L破碎液里（破碎掖：50mM Tris-Cl(PH8.5) 5mM EDTA 0.14M NaCl），搅

拌，发现菌液发粘，菌体不能够很好分散，用高压匀质机破碎，加压后，菌液不能进入匀质机，速度很慢，

请问是何原因？能有好的办法解决，很好用匀质机快速破碎菌体？

将破碎液的量加大，不能很好分散可能是量太大 。超声处理5－10分钟，菌液粘度即可大大降低，也可促进

菌体分散。
不同型号的设备功率不一样，功率的大小决定了使用变幅杆的大小范围（直径2mm至几十毫米），你使

用多大的变幅杆就在设备的上调至该刻度（很简单的）！变幅杆的大小决定了处理量5ml一下选3mm，5～

50ml可选6～8mm，50ml以上选10mm的变幅杆，依此类推！占空比不用关心的，主要是指超声时间和停

顿时间的比值。

酵母破碎的问题

一般的PROTOCOL都是用glass beads 破碎酵母细胞sigma G-8772 酵母破碎效果好的我所做过的方

法中还是玻璃珠，效率很高，而且对目的蛋白活性不会有什么影响。一般应该用这个方法。

化学裂解的方法，10g酵母 加1ml的乙酸乙酯，充分搅拌至液体状。此法的裂解效果不错的

加尿素裂解液（尿素8mol/L, NaCl 0.5mol/L,Tris 20mmol/L, EDTA 20mmol/L, 2%SDS, PH值

8.0），据说效果可以。

毕氏酵母细胞破碎法

在破碎遇到的问题是菌体浓度太低，OD620nm在4-6之间。细胞破碎仪的最低破碎体积为4ml左右，这

样再稀释一倍，OD就到2-3啦，我们怀疑破碎完溶出蛋白和酶活测定时会测不准。所以请教大家细胞破碎时

最低的菌浓多少为下限？我们的菌是一种棒杆菌。 破碎后，你可将液体放入透析袋中浓缩。

我们所做的方法是按照1：20的比例将离心后的菌体（e.coli）溶解于超声缓冲液（50mM 磷酸 pH

8.0 ）300w 10s/10s 破碎20分钟。做了镜检！基本全被破碎了！我做蛋白纯化的，做的包涵体。实验中

我们的菌体浓度相对独立，与培养液中的菌体od无关，不收其限制，便于操作者调控。

一般按每g湿菌体加5-10ml裂菌缓冲液。

超声肯定会产热，所以一定要有降温装置，除非你需要得成分耐高温。