还原糖是指含有自由醛基(如葡萄糖)或酮基(如果糖)的单糖和某些二糖(如乳糖和麦芽糖)。在碱性溶液中,还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原,而糖本身被氧化
省部重点实验室
第1楼2012/05/09
四、样品糖的定量测定
(1) 样品溶液预测定:吸取费林试剂甲液及乙液各5.00mL,置于250mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL,加热使其在2min内沸腾,准确沸腾30s,趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液,滴定时要保持溶液呈沸腾状态。待溶液由蓝色变浅时,以每2s 1滴的速度滴定,直至溶液的蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。
(2) 样品溶液测定:吸取费林试剂甲液及乙液各5.00mL,置于锥形瓶中,加蒸馏水10mL,加玻璃珠3粒,从滴定管中加入比与测试样品溶液消耗的总体积少1mL的样品溶液,加热使其在2min内沸腾,准确沸腾30s,趁热以每2s 1滴的速度继续滴加样液,直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。平行操作3次,取其平均值。
五、结果处理
F*V
总糖(以葡萄糖计)%= *100
m*V*1000
F*V
还原糖(以葡萄糖计)%= *100
m*V*1000
其中:m──样品重量,g;
式中:F──10mL费林试剂(甲液和乙液各5.00mL)相当于葡萄糖的量,mg;
V──标定时平均消耗还原糖或总糖样品溶液的总体积,mL;
V1──还原糖或总糖样品溶液的总体积,mL;
1000──mg换算成g的系数。
注意事项
(1)费林试剂甲液和乙液应分别贮存,用时才混合,否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀,使试剂有效浓度降低。
(2)滴定必须是在沸腾条件下进行,其原因一是加快还原糖与Cu2+的反应速度;二是亚甲基蓝的变色反应是可逆的,还原型的亚甲基蓝遇空气中的氧时会再被氧化为氧化型。此外,氧化亚铜也极不稳定,易被空气中的氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入,避免亚甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加消耗量。
(3)滴定时不能随意摇动锥形瓶,更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定,以防止空气进入反应溶液中。