色谱条件选定

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固相萃取_反相高效液相色谱法同时测定浓缩果汁中的11种有机酸

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应助达人

反相高效液相色谱法测定果汁中11 种有机酸条件的优化

摘　要　提出了一种利用高效液相色谱同时分析果汁中11 种有机酸的优化的方法。在Prontosil 120-10-C18H(10μm ,4. 6 mm i. d. ×250 mm) 色谱柱上,3 % CH3OH20. 01 mol/L K2HPO4 (pH 2. 55) 溶液做流动相,流速为0. 5mL/ min ,柱温为30 ℃,紫外检测波长为210 nm时,可以较好地分离和测定果汁中常见的11 种有机酸。该方法相对标准偏差0. 31 %～1. 59 % ,回收率96. 8 %～102. 0 % ,各种酸的线性相关系数r > 0. 9996 ,具有较高的准确度和精确度,方法简便,可应用于果汁中有机酸的检测。
有机酸是果汁酸味的主要成分,其种类和含量高低与果汁的品质和风味有极密切的关系[1 ,2] 。原果汁营养丰富,但由于生产成本较高,果汁的掺假行为经常发生,对天然果汁的真伪鉴定是当今国内外检验的一个热点[3] 。不同种类的天然果汁中,有机酸的种类和含量差别很大。在一定条件下,可以通过测定各种有机酸的含量来鉴别果汁饮料掺假与否[4] 。因此,果汁中多种有机酸的分析测定具有重要的意义。
反相高效液相色谱法是近几年来发展较快的方法,然而现有的报道仅限于6～7 种有机酸的分离[2 ,5～7 ] 。本研究通过优化反相C18柱的色谱条件,可同时分离测定果汁中的11 种有机酸,便捷、快速、准确。

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里面的第三章 讲的是检测条件摸索


反相色谱法与本实验液相系统　
一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。反相色谱在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。
随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。但值得注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。
HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。
本实验所用高效液相色谱仪为SHIMADZU LC-2010C HT，反相色谱柱Shim-pack C18 VP-ODS （250 mm × 4.6 mm, 5 μm），紫外检测器。

3.2 液相检测条件摸索

3.2.1 波长选择

图3.1 发酵中有机酸全波段扫描图

Figure 3.1 Full spectrum scan of organic acid